文档介绍：细胞凋亡检测
细胞凋亡概念
是多细胞有机体为维护内环境稳定,由基因控制的细
胞自主、有序的死亡过程
涉及一系列基因的激活、表达和调控
在生物体进化、维持内环境稳定、多系统发育等过程
中起着重要作用
细胞凋亡过程
细胞凋亡的几种检测方法
形态学观察:普通光镜、荧光显微镜、透射电子显微镜
磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)
线粒体膜势能的检测
DN***断化检测:大分子染色体DN***段、 DNA Ladder
脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)
半胱氨酸蛋白酶Caspase家族活性的检测
形态学观察
光学显微镜和倒置显微镜:体积缩小、核深染、核碎裂、
凋亡小体形成、无炎症反应
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜: DNA特异性染料
( Hoechest 33342/33258, DAPI)
透射电子显微镜:超微结构是诊断凋亡的最可靠指标
Annexin V法
磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS):细胞凋亡早期从内侧翻转到细胞膜表面
Annexin V:钙依赖性的磷脂结合蛋白,与PS可高亲和力特异性结合
Annexin V 与 PI联合
碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
已开发出多种荧光标记的试剂盒
流式细胞仪分析
荧光显微镜结果
线粒体膜势能检测
线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡级联
反应过程中较早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征
(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前
亲脂性阳离子荧光染料(如Rhodamine 123、Dioc6、JC-
1、TMRM等)可结合到线粒体基质,流式细胞仪检测
细胞的荧光强度
不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变
化