文档介绍：免疫学技术免疫学技术简介
本资料由豆丁若莲文档搜集
更多文档请点击99
以免疫学理论为基础的实验操作技术。它已广泛应用于各种传染病、免疫性疾病、肿瘤的诊断与防治。
体液免疫测定法
某些细菌抗原与对应抗体在体内结合时,可出现杀菌、溶菌等现象。抗原与对应抗体在体外结合时,由于抗原的物理性状和参加物质(电解质、补体等)的不同,可出现凝集、沉淀、补体结合等反应。由于抗体存在于血清等体液中,一般都采用血清进行抗原抗体反应(又称血清反应)试验。
凝集反应颗粒性抗原(如病原微生物或红细胞等)与特异性抗体结合时所出现的凝集现象。根据反应中附加因素的不同,可分为下述几种形式:
直接凝集反应在微生物或红细胞悬液中,加入含有特异性抗体的血清,在一定浓度的电解质(如生理盐水)参与下,微生物或红细胞凝集成团。①细菌凝集反应:细菌与相应抗体的凝集现象。例如伤寒杆菌只能被伤寒杆菌抗体凝集。用已知的细菌悬液检查病人血清中抗体的效价,或用已知的免疫血清鉴定从病人标本中分离的细菌;②红细胞凝集反应:同种中某些个体的红细胞与其他个体血清中的抗体发生的特异性凝集反应。即不同血型红细胞的同种凝集,也叫血凝反应。可用于血型检定和交叉配血试验,以选择合适的供应者。如果病毒颗粒(如流感病毒)上有血凝素,它与某些脊椎动物(豚鼠、鸡、猴等)的红细胞表面上的受体结合,就会出现非特异性的凝集。这种病毒血凝现象可被特异性抗体抑制,产生血凝抑制反应。用这种反应鉴定病毒型和株以及测定特异性抗体。
抗球蛋白试验一种极为敏感的检查不完全抗体的方法。例如对红细胞的不完全抗体只能与含有相应抗原的红细胞发生结合,但不发生凝集。不完全抗体是球蛋白,也有抗原性,能与其对应抗体结合。当加入抗该种球蛋白的抗体时,由于球蛋白与抗球蛋白抗体的特异性结合而出现凝集反应,显示出不完全抗体的存在。
间接凝集反应将小分子抗原吸附在无关颗粒(如红细胞、乳胶颗粒、活性炭等)上,再与抗原的对应抗体作用而出现的凝集反应。若将抗体预先吸附在无关颗粒上,再与对应抗原作用出现凝集,这叫做反相间接凝集反应。若是用红细胞作为载体颗粒,称为间接血凝反应。若是用乳胶作为载体颗粒,则称为间接乳胶凝集反应。①间接血凝反应:将抗原成分吸附或结合在红细胞上,然后加入相应的抗体,由于抗体与抗原的特异结合,而把结合抗原的红细胞间接(被动)凝集起来,这时,红细胞起到载体的作用,能使微量可溶性抗原与抗体结合,成为肉眼可见的血凝现象。间接血凝反应是检测抗体的敏感方法。例如,可用脑膜炎球菌、沙门氏菌的抗原成分、乙型肝炎表面抗原与红细胞结合以检测病人血清中相应的抗体。若将特异性抗体结合于红细胞上,通过血凝反应检测相应的抗原,则称为反向间接血凝反应。这是检测微量抗原(如***、细菌成分)和早期快速诊断传染病的敏感方法,现已用于诊断脑膜炎、布鲁斯氏菌病、出血热、病毒性肝炎等。此外,还可用于检测人和动物的组织抗原和激素抗原(图1);②间接乳胶凝集反应:用无活性乳胶颗粒(如聚苯乙烯乳胶)代替间接血凝反应中所用的红细胞作为载体,将抗原成分(或抗体)包被其表面,形成大颗粒型试剂,可与相对应的抗体(或抗原)结合而出现间接凝集反应;③协同凝集反应:间接凝集反应的1种。人们发现葡萄球菌表面有1种蛋白成分,简称A蛋白(SPA),它是一种完全抗原,可与人和多种哺乳动物血清中的免疫球蛋白G(IgG)的Fc段呈非特异性结合。IgG的Fc段与A蛋白结合后,仍能充分暴露出IgG特异的Fab部分,再与其对应的抗原呈特异性结合。根据A蛋白的这一特点,人们将IgG包被在富含A蛋白的葡萄球菌上,再与对应的抗原作凝集反应。由于葡萄球菌只在此类反应中起协同作用,所以把这一反应称为协同凝集反应。这一反应快速而简便,广泛应用于细菌、钩端螺旋体、病毒等的鉴定和它们所引起的疾病的诊断。
沉淀反应在有适量电解质的情况下,可溶性抗原(如细菌浸出液、动物血清)与对应抗体结合,形成沉淀物的反应。由于抗原与抗体在不同的环境条件下结合,以及附加因素的不同,沉淀反应可分为6类。广泛被应用于鉴定混合系统的蛋白组分,鉴定菌型,诊断疾病以及在法医学上鉴定血迹。
球状沉淀反应在***的试管内,先加入已知抗体的血清,然后在其表面加入待测的抗原,如果两层液面交界处出现白色沉淀环,即为阳性反应。这一技术用于抗原的定性试验。
凝胶扩散以琼脂凝胶或其他类似物质为介质进行的沉淀试验。把抗原和抗体分别放在介质中,经扩散后,抗原与抗体相遇处就形成沉淀线。凝胶扩散可用于抗原-抗体系统的定性和定量分析。凝胶扩散法分为单向和双向两类。
对流免疫电泳在电场作用下进行的双向凝胶扩散。其原理是:在通电的琼脂中,抗原和抗体向相反的电极移动,当它们在最适宜的比例处相遇时,可形成白色的沉淀线。实际上,这是一种加速的双向琼脂扩散试验。试验所需