文档介绍：免疫学技术大纲上海交大
第一章抗原抗体反应目的要求:
第一节抗原抗体反应的原理
抗原抗体反应可分为两个阶段,第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的反应阶段,此阶段反应快,仅需几秒至几分钟,但不出现可见反应。第二阶段为可见反应阶段,即抗原抗体复合物在环境因素(如电解质、pH、温度、补体等)的影响下,表现为凝集、沉淀、补体结合等肉眼可见的反应。此阶段反应慢,常需数分钟、数小时或甚至数日。抗原抗体反应──是指抗原与相对应的抗体之间所发生的特异性结合的反应。,可发生吞噬、溶菌、杀菌、中和***等作用。,在不同的实验条件下可出现凝集反应、沉淀反应补体参与的反应等各种类型的反应。
第二节抗原抗体的主要理化特性
一、亲水胶体转化为疏水胶体二、(库伦引力或静电引力)
第三节抗原抗体反应的特点
一、特异性抗原抗体的结合实质上是抗原决定簇与抗体超变区之间的结合,由于两者在化学结构和构型上呈互补关系,所以结合具有高度特异性,这种特异性如同钥匙和锁的关系。由于抗原成分复杂,常含有多种抗原决定簇,如果两种不同抗原分子上有相同的抗原决定簇或抗原、抗体之间构型部分相同皆可出现交叉反应。二、最适比例(可见性)在沉淀反应和凝集反应中抗原或抗体极度过剩则无沉淀物形成,只有在抗原抗体只有在最适比例时才出现肉眼可见的沉淀物。网络学说──大多数抗体是两价的,而抗原是多价的当抗原与抗体处于等价带时,可互相结成为具有立体结构的巨大网络状聚合体,形成肉眼可见的沉淀物。但当抗原或抗体过量时,由于结合价不能相互饱和就只能形成较小的沉淀物或可溶性抗原抗体复合物。三、可逆性在一定条件下抗原抗体复合物这一反应是可逆的。抗原抗体复合物解离的程度与两者的亲和力有关。亲和性和亲和力亲和性──指抗原抗体之间的固有的结合力。亲和力──与抗体结合价相关,是抗体功能结合力
第四节影响抗原抗体反应的因素
一、电解质抗原抗体发生特异性结合后,虽由亲水胶体变为疏水胶体,若溶液中无电解质参加,仍不出现可见反应。二、pH抗原抗体反应必须在合适的pH环境中进行。三、温度
第二章免疫原和抗血清的制备目的要求:、亲和层析、、
抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素,也是整个免疫反应的基本条件。抗原的纯化是制备特异性抗体的先决条件,制得的抗体可用于纯化抗原和检测抗原。
第一节免疫原的制备
一、颗粒性抗原的制备颗粒性抗原是指细胞抗原或细菌抗原。二、可溶性抗原的制备和纯化(一),经高速组织捣碎机研磨、酶消化、离心等手段,而获得单个细胞。(二)离心分离抗原差速离心法──低速与高速离心交替进行,用于大小差别较大的颗粒之间的分离。梯度密度离心法──是一种区带分离法,通过梯度密度来维持重力的稳定性,使分离物在不同的液体比重中得以分离。(三):用***化锰、硫酸鱼精蛋白、DNA或RNA酶等。:这是最古老而又最经典的蛋白质纯化分离技术。最常用的是饱和硫酸铵。:(乙醇、***):(PEG聚乙二醇)(四)凝胶过滤和离子交换层析凝胶过滤──它利用微孔凝胶,将蛋白质分子分成大、中、小三种类型,由于它根据分子量的大小来分离蛋白质又名分子筛。离子交换层析──利用一些带离子基团的纤维素或凝胶,吸附交换带相反电荷的蛋白质抗原,将蛋白质抗原按电荷不同或量的差异分成不同的组分。(五)(1)抗原或抗体必须单价特异性(2)抗原与抗体之间必须有强的亲和力,这种亲和力决定于抗原决定簇的性质、数量。对抗体来说还决定于抗体来源于动物的种类和免疫时间。(3),有载体结合法、物理吸附法、交联法和网络法等。、半抗原免疫原的制备半抗原单独不能刺激机体产生抗体,它必须与载体结合后才能刺激机体产生相应的抗体。四、佐剂佐剂──是指在免疫动物时,与抗原同时注入的种辅助剂,它能促进抗体的产生。最常用的佐剂是福氏佐剂,用羊毛脂、石蜡油和卡介苗混合而成。不完全佐剂──羊毛脂+石蜡油完全佐剂──羊毛脂+石蜡油+卡介苗
第二节抗血清的制