文档介绍：第卷分析化学 HUAXUE) 3
19993 Chinese Journal Chemistry 29r7299
长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析
孙明忠季怡萍丁兰赵大庆。倪嘉缵
泄蒲г撼ご河τ没а芯克⊥粱в胛锢砜7攀笛槭遥ご
(MALDI-TOF-MS)4
种主要酶:磷脂酶、精氨酸酯酶、纤溶酶及￡.氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定,
MALDITO-FMS
猅法分析蛇毒酶的纯度和分子量简捷、快速且重现性好,是聚丙烯酰***凝胶
电泳所无法比拟的。
关键词基质辅助,激光解吸质谱,白眉蝮蛇,酶
1 引言
蛇毒是自然界中最丰富、最集中的酶源之一,其组成蛋白质半数以上是具有各种催化活性
的酶类,迄今为止人们已从蛇毒中发现了近种酶⋯。采用常压层析的方式,从长白山眉蝮
4A2(PLA)(AEase)(fibrolase)SDSPAGE
电泳鉴定为单一蛋白,质谱结果与电泳结果一致,￡一氨基酸氧化酶—
明该酶由两个不相等亚基组成。
自虷 3Tanaka3TOFMSMALDITOFMS
法由于特有的高灵敏性、测量质量范围宽等优点,已越来越广泛被用来分析生物
H5]
报道较少。
2
样品制备
PDEAESephadex, 一四步层析得到;
瑼.,;瑼一,,;
珿次珹.—得到。
仪器与实验条件
す饨馕缋敕尚惺奔渲势滓 ScientificUSA)N2337nln
3,真空度×~,加速电压,吸引电压 kV475,质
谱信号单次扫描累加次,正离子谱测定。—蛋白标样质量校正误差为.%。
实验方法’
O50疞的酶液,取止酶液置于样品杯中,加入等体积芥子酸
2
检测,质量范围痾 kDa
收稿;—.接受。
本文系吉林省科委资助项目。
298 分析化学第卷
3
MALDI-TOFMS
PMALDITOFMS1SDSPAGEPLA138kDamz
140080P[M+H]+mz69953mz峰分别
HA[M+2H]2+[2M+H]+
子峰进一步确证。同时还出现了“、、
H]+
FibrolaseMALDITOFMS
2fibmlaseMALDITOFMSmz质谱峰为的峰,
m117519mz471251fibrolase
的存在。
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l 磷脂酶的基质辅助激光解吸质谱图
2
ng1 The matIias8i8ted18sedesorptinini2ation
The Fibrolase
speetrum(MALDI-rIDF_MS)0f
条件同图 F1)
基质:芥子酸 acid)(1aser
篘晃缪: ;排斥电压
(repeller)300。
腗.
AEase29458415Da
⒘酱蜧鸵淮蜛所得质谱图结合电泳结果认为该酶由两
个不相等亚基构成,痾的质谱峰为一个亚基的分子量,痾的质谱峰则为
另一个亚基的分子量,痾和痾 1149726
和二聚体质谱峰,痾 2783