文档介绍：临床生物化学实验室基本技术与管理
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教学目标和要求
掌握光谱分析中的对比法、摩尔吸收系数法、荧光法和比浊法测定的方法原理,在生化检验中的应用及注意事项;区带电泳的原理、应用及影响因素;离子选择性电极法测定的原理和注意事项。
熟悉离心技术,其它电泳技术和层析技术中的HPLC及亲和层析的原理和应用;免疫分析技术、生物传感技术的概念和应用原理。
了解光谱、层析等常用生化技术的应用原理和方法,生物芯片技术的概念和应用原理。
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本章主要内容
色谱检验技术
电泳技术
免疫学检验技术
电化学分析技术
生物传感技术
光谱检验技术
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第一节光谱检验技术
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利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征,以此来确定物质性质、结构或含量。
根据物质对光谱响应特征的不同,可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。
在临床生物化学检验中,光谱分析是一类十分重要的技术,应用极为广泛。它既可以研究物质的结构分析,也可以对特定物质进行定性或定量的分析。
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一、吸收光谱分析法
吸收光谱是指波长连续分布的光透过物质时,某些波长的光被物质吸收而产生的暗线或暗带组成的光谱。它是物质定量测定的基础。
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一、吸收光谱分析法
利用吸收光谱对物质进行定量的技术就是吸收光谱分析法,是实验室最常用的分析技术之一。它操作简便、快速,线性范围较宽,应用广泛。
目前最常应用的技术有可见-紫外光光度分析和原子吸收分光光度法。
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可见-紫外光分光光度法
1检测原理
可见-紫外光分光光度法的理论基础基于朗伯-比尔定律。
可见-紫外光区一般是指波长从200nm至760nm范围内的光,其中小于400nm的是紫外光。
该分析是根据物质的分子对光的吸收特性进行物质定量分析或分子结构分析的方法。
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在可见-紫外分光光度法中,通常在测定未知样品浓度的同时,与同一个已知浓度的标准物作比较,可以利用以下公式计算而求出其浓度,即比较法。
因为As= KCsb Ax= KCxb
其中A为吸光度, C为溶液的浓度,其下标s、x分别表示属标准物、待测物;k为常数,b为比色杯的光径。
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用比较法定量时,选用的标准品溶液的浓度若接近于样品溶液的浓度,可减少误差。
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