文档介绍：山东大学实验报告 2017年 12月 4 日
___________________________
科目:微生物学实验题目:微生物鉴定常用的生理生化试验姓名:丁志康
目的要求
,从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
。
。
。
。
基本原理
1、生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶只要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖;脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸;蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实;淀粉遇碘液会产生蓝色,但细菌水解淀粉的区域,用碘测定不在产生蓝色,表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH,使pH降低,加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变成深红色,说明胞外存在着脂肪酶。
2、糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳糖、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳的等);有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气;伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气,不能分解乳糖;普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气,不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白胨,指示剂(溴甲酚紫),倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时,溴甲酚紫指示剂可由紫色()变为黄色()。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。
3、IMViC反应是吲哚试验、***红试验、伏-普试验和柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。这四个实验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌,多用于水的细菌检查。
(1)吲哚试验:某些细菌有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚(靛基质),吲哚能与对二***氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。
(2)***红试验:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生***酸,***酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等,,加入***红指示剂可呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其他物质(如醇、醛、***、气体和水),,加入***红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用,因为前者呈阳性的细菌,后者通常为阴性。
(3)伏-普(二乙酰)试验:某些细菌能发生如下转换:葡萄糖→***酸(脱羧)→乙酰***甲醇→2,3—丁烯二醇,在有碱存在时氧化成二乙酰,后者和胨中的胍基化合物起作用产生粉红色的化合物。本试验目的在于测定细菌产生乙酰***甲醇的能力。
(4)柠檬酸试验:当细菌利用铵盐作为唯一氮源,并利用柠檬酸盐作为唯一碳源时,若细菌能利用这些盐作为氮源和碳源而生长,则能利用柠檬酸钠产生碳酸盐,从而与利用铵盐产生的氨反应,形成NH4OH,使培养基呈碱性,使指示剂溴麝香草酚蓝(BTB)由淡绿转为深