文档介绍：枯草芽孢杆菌在生物菌肥中的应用
作者 07级生物工程4班陈聪
指导教师马传营
山东农业大学学士学位论文答辩
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长期以来,化学肥料的大量使用带来土壤板结、土壤微生物区系发生变化、食品质量不安全等问题。生物菌肥是近年来发展起来的一种新型肥料,具有改善土壤、抗旱、培肥地力、抵抗病虫害、解决土壤化肥农药残留问题等作用。
枯草芽孢杆菌作为植物病害生防菌之一,具有较强的防病作用。该菌制剂的批量生产工艺简单,成本较低,使用方便,储存期长,其制剂稳定性强,是一种较理想的生防微生物。
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ⅰ. 发酵种子培养
ⅱ. 实验室发酵生产监测
ⅲ. 拮抗实验
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ⅰ. 发酵种子培养
①菌种活化
将枯草芽孢杆菌种子瓶与200ml的LB培养基拿入无菌操作室,以1:1000的比例在每瓶培养基中加入200μl 种子,放入摇床36℃,200r/min培养过夜
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②种子扩大培养
将上步得到的200ml培养瓶中的菌种按3%的接种量接种到500mlLB培养基中,36℃,200r/min摇床培养,预得上罐前的种子
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ⅱ. 发酵生产监测
①发酵生产模拟(实验室发酵罐)
配制好工业发酵培养基,按流程进行洗罐→空消→投料→室消→降温→接种后进行每天两次的发酵生产监测
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②发酵生产监测
实验室进行0004,0005,0006发酵罐的生产监测,每天上午、下午个一次。
取样
制片
镜检
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ⅲ. 拮抗实验
利用平板对峙法进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis )的拮抗实验。
将培养好的2mm×2mm的玉米小斑病菌菌丝块接于燕麦培养基中央,25℃培养3d,在离接种处25mm的左右两边分别划线接种枯草芽孢杆菌,对照组只接种玉米小斑病菌菌丝,25℃培养5d,记录并观察菌丝生长状况。每组处理3次重复。
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①发酵生产监测
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发酵时间
发酵情况监测
第一天上午
菌体量多,应处于对数生长期
下午
大量菌体,应处于对数期末期
第二天上午
大量菌体,处于产物合成状态,与正常周期相符
下午
大量菌体,少量芽孢,发酵正常
第三天上午
芽孢数量有所增加,仍处于产物合成阶段
下午
大量芽孢,处于发酵末期