文档介绍：§ DNA的粗提取与鉴定
一、基础知识
(一)提取DNA的方法
选用一定的物理或化学方法,分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
提取DNA,去除其他成分
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等
在物理和化学性质方面的差异
⑴ DNA的溶解性
DNA和蛋白质等成分
在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同
利用这一特点,
选择适当的盐浓度
就能使DNA充分溶解,
而使杂质沉淀;
或者让其他成分溶解,
DNA析出
⑵ DNA不溶于酒精溶液
⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
DNA不溶于酒精溶液,
但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。
将DNA与蛋白质进一步分离。
⑵ DNA不溶于酒精溶液
⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶——水解蛋白质,
对DNA没有影响
②高温——大多数蛋白质不能忍受60~80℃
而DNA在80℃以上才会变性
③洗涤剂——溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质
但对DNA没有影响
试剂:
(二)DNA的鉴定
条件:
二苯***
沸水浴条件下, DNA遇二苯***被染成蓝色
沸水浴
现象:
(一)实验材料的选取
(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液
(三)除去滤液中的杂质(纯化)
(四) DNA的析出与鉴定
二、实验设计
(一)实验材料的选取
从下列材料中选取2~3种
原则:
菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜;
鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞;
在液体培养基中培养的大肠杆菌
凡是含有DNA的生物材料都可以考虑
选用DNA含量相对较高的组织
从核DNA数目来看,猪38条,鸡78条,哺乳动物血0条,猕猴桃58条,洋葱16条,豌豆14条,菠菜12条,大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。
哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。
液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。
鱼卵是减数分裂的产物。
(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液
1、动物细胞
2、植物细胞
——容易破碎
——需要溶解细胞膜
鸡血细胞溶液:
加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌, 过滤后收集滤液
想一想:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,
水分大量进入血细胞,使血细胞胀裂;
加上搅拌作用,加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂, 从而释放出DNA
①加入一定的洗涤剂和食盐
②充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液
想一想:洗涤剂和食盐的作用分别是什么?
洗涤剂——离子去污剂,能溶解细胞膜,利于DNA释放
食盐——NaCl,利于DNA的溶解于研磨液中