文档介绍：胚胎干细胞 与组织工程
胚胎干细胞的定义
1、全能干细胞
2、多能干细胞
3、专能干细胞
一、胚胎干细胞研究进展
(一)1981年英国剑桥大学的Evans和Kaufman用延缓着床的胚泡的ICM (inner cells mass)获得鼠的ES细胞,同年美国的Maryin用条件培养基获得鼠的ES细胞。Roberston用不同品系的鼠胚和具有不同遗传疾病的胚胎建立了细胞系并进行了多能性和嵌合特性的分析。现在已对猪牛羊等大动物的胚胎干细胞进行了一系列建系和分化研究。
(二)国内的研究概况
1、1987年上海细胞生物学研究所获得小鼠ES细胞。
2、1996年北京大学尚克刚建立了小鼠的ES细胞系并对其特性进行了系列研究。
3、近几年赖良学、常万存、徐令、钱永胜、窦忠英等建立了兔、猪、牛等大动物的胚胎干细胞系或类胚胎干细胞系
4、山东农业大学生物工程实验室获得了鸡的胚胎干细胞并用其制备了嵌合体。
(三)1995年Thomson从恒河猴的囊胚中分离克隆建立了第一个灵长类的细胞系。
1998年Thomson利用自愿捐献的体外受精的胚胎免疫法除去透明带。在鼠胎儿成纤维细胞饲养层上获得了5个细胞系。连续培养5个月传到32代仍可继续生长。同年Gearhart和shamblott利用流产胎儿的原始生殖细胞建立了人的胚胎干细胞系(EG)随后澳大利亚、新加坡、以色列等国也获得了人的ES细胞
二、ES细胞生物学特性
(一)ES细胞的一般特性
1、胚胎干细胞的基本特点----发育全能性能分化出属于三胚层的分化细胞。
2、可以在体外无限扩增。
3、具有种系传递功能。形成嵌合体的能力
4、在体外可以进行基因工程处理:如转基因,基因打靶,基因诱变
(二)ES细胞的形态
1、体外培养的ES细胞无论有无饲养层的条件下培养,细胞都为圆形或卵圆形,呈集落生长时,细胞间紧密堆积,无明显的细胞界限,形似鸟巢。
2、细胞消化分散后的单个细胞体积小、亮、圆形、核大、胞浆少,一个或多个核仁
(三)ES细胞的核型
(四)ES细胞呈现高的端粒酶表达活性
(五)人ES细胞具有表达早期胚胎表面抗原(SSEA,stage-specific embryonic antigen)的特性
(六)ES细胞的体内分化
1、在免疫缺陷小鼠体内分化
三胚层结构或畸胎瘤
2、将ES细胞注入囊胚中可以形成形成嵌合体动物
1984年bradly 获得了注射ES细胞的嵌合体鼠