文档介绍：基因工程制药-1ic engineering pharmaceutics
张革中山大学药学院
微生物与生化制药实验室
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2018/2/25
中山大学药学院张革
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基因工程(Gene Engineering):
基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的. 其基本步骤 
(1)提取目的基因.  
(2)目的基因与运载体结合. 形成一个重组DNA分子. 
(3)将目的基因导入受体细胞.
(4)目的基因的表达.
基因工程技术最成功的成就:用于新型生物技术药物的研制
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1、限制性核酸内切酶
是一类能识别特殊核甘酸序列,并水解DNA分子的磷酸二酯键,从而切断双链DNA的核酸水解酶。
主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来DNA的入侵作用。
一、基因工程菌的构建与筛选(一)工具酶
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Ⅱ型酶
识别位点是一个回文对称结构,并且切割位点也在这一回文对称结构上。
许多Ⅱ型酶切割DNA后,可在DNA上形成粘性末端,有利于DNA片段的重组。
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1)II型限制性内切酶的基本特征
5‘… G C T G A A T T C G A G … 3’
3‘… C G A C T T A A G C T C … 5
EcoR I的识别序列
EcoR I的切割位点
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2)核酸内切酶作用后的断裂方式
粘性末端:
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平末端:
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3)同裂酶(isoschizomers)
指来源不同但识别相同靶序列的核酸内切酶。
同裂酶进行同样的切割,产生同样的末端。但有些同裂酶对甲基化位点的敏感性不同。
Example:
限制酶HpaⅡ和MspⅠGG),当靶序列中一个5-甲基胞嘧啶时HpaⅡ不能进行切割,而MspⅠ可以。
Sma I (Serratia marcescens SB)
CCC^GGG
Xma I (Xanthomonas malvacaerum)
GGG
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4)同尾酶(isocaudamer)
指来源不同、识别靶序列不同但产生相同的粘性末端的核酸内切酶。
patible end)。。
杂种位点(hybrid site):由一对同尾酶分别产生的粘性末端共价结合形成的位点。
一般不能被原来的任何一种同尾酶识别。
G GATC C T GATC A
C CTAG G A CTAG T
BamHⅠ
BclⅠ
G GATC A
C CTAG T
GGATC TAGT
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