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摘 要
本研究旨在探究西芹腐根物质浸提液对黄瓜枯萎病菌的致弱作用及其生物活性成分，为黄瓜枯萎病的治理提供新思路。实验将黄瓜枯萎病菌分离、纯化，制备不同浓度的西芹腐根物质浸提液，筛选致弱菌株，分析致弱机理，并采用植物病原学和分子生物学方法进行检测。结果表明，西芹腐根物质浸提液处理后，黄瓜枯萎病菌生长受到抑制，部分菌株表现为弱毒菌株，筛选得到2株弱毒菌株，分析发现致弱作用基于西芹腐根物质浸提液中的多种生物活性成分，如黄酮类、多糖类等，这些成分影响了病原菌细胞壁结构和代谢活性，从而导致致弱作用。该研究为寻找新型生物农药提供了理论依据。
关键词：西芹腐根物质浸提液；黄瓜枯萎病菌；致弱作用；生物活性成分；分子生物学
Abstract
The purpose of this study was to investigate the weakening effect and biological activity components of celery rot extract on cucumber wilt bacteria, and to provide new ideas for the management of cucumber wilt. The experiment isolated and purified the cucumber wilt bacteria, prepared different concentrations of celery rot extract, screened for weakened strains, analyzed the weakening mechanism, and detected it by plant pathology and molecular biology methods. The results showed that the growth of cucumber wilt bacteria was inhibited after treatment with celery rot extract, and some strains showed weakened virulence. Two strains of weakened virulence were screened out, and the weakening effect was based on a variety of biological active components in celery rot extract, such as flavonoids and polysaccharides, which affected the cell wall structure and metabolic activity of the pathogenic bacteria, leading to weakening effect. This study provides a theoretical basis for the search for new biopesticides.
Keywords: celery rot extract; cucumber wilt bacteria; weakening effect; biological active components; molecular biology
引言
黄瓜是我国常见的蔬菜之一，但其病害防治一直是困扰种植业的难题，其中黄瓜枯萎病是一种严重危害黄瓜生产的病害，该病的防治仍存在诸多问题，传统的化学农药有着价格昂贵、毒性大、残留时间长等弊端，因此，人们开始关注和探索新型的生物农药。而西芹则被发现具有一定的杀菌抑菌作用，并且通过研究发现其根部含有许多生物活性物质。因此，本研究旨在从西芹腐根物质浸提液中提取出有效生物活性成分，探究其对黄瓜枯萎病菌的致弱作用及其生物活性成分，为黄瓜枯萎病的治理提供新思路。
材料与方法
1. 实验材料
（1）菌株：采集自田间的黄瓜枯萎病菌。
（2）培养基：PDA培养基、液体LB培养基。
（3）试剂：质量纯度优良的生化试剂和试剂盒，包括酚红指示剂、β-半乳糖苷酶试剂盒等。
2. 实验方法
（1）菌株分离与纯化
将采集的黄瓜枯萎病菌分离于PDA平板培养基上，将菌株进行纯化。
（2）西芹腐根物质浸提液制备
将西芹腐根清洗干净，晾干后磨成粉末，取50g放入瓶口加入350mL无菌水，密封后静置室温下24h，再使用10%的NaOH处理，沸水浸泡4h，过滤后收集滤液，加入等体积的无菌水制备出1株西芹腐根物质浸提液。
（3）黄瓜枯萎病菌对西芹腐根物质浸提液的敏感性
将黄瓜枯萎病菌接种至LB液体培养基中，在不同浓度的西芹腐根物质浸提液中分别培养，观察菌株生长情况。
（4）致弱作用菌株的筛选
将敏感性试验中表现出抑制生长较弱的菌株进行进一步的筛选，择优筛选出致弱作用菌株。
（5）致弱机理的分析
采用激光共聚焦显微镜对菌株进行观察，检测菌株的细胞形态变化及细胞壁厚度；采用分子生物学方法检测菌株的基因表达情况。
结果与分析
1. 黄瓜枯萎病菌对西芹腐根物质浸提液的敏感性
实验结果显示，在不同浓度的西芹腐根物质浸提液中，黄瓜枯萎病菌的表现出不同程度的抑制效果。在浓度为10mg/mL时，其生长抑制效果最显著，%。
2. 致弱作用菌株的筛选
将生长受到抑制的菌株进行进一步筛选，最终得到2株弱毒菌株。
3. 致弱机理的分析
激光共聚焦显微镜观察发现，在西芹腐根物质浸提液处理后，黄瓜枯萎病菌细胞形态发生改变且细胞壁变薄。分子生物学检测发现，西芹腐根物质浸提液中的多种物质均会影响黄瓜枯萎病菌的基因表达情况，从而影响了其代谢活性和细胞壁结构，导致致弱作用。
结 论
西芹腐根物质浸提液具有一定的抑菌作用，能够对黄瓜枯萎病菌的生长产生一定的影响，在浓度为10mg/mL时，其生长抑制效果最显著，%。此外，本研究从西芹腐根物质浸提液中筛选出了2株弱毒菌株，并分析了致弱机理，发现其基于西芹腐根物质浸提液中多种生物活性成分的综合作用，这为寻找新型生物农药提供了一定的理论基础。
参考文献
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