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2、初步认识细菌的形态特征。
3、学习细菌的革兰氏染色原理和方法 4 、了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜的染色
5、学习训练无菌操作技术。
实验目的
细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
实验原理
1 细菌的简单染色
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。
1、菌种
枯草芽孢杆菌12～18h培养物
金黄色葡萄球菌24h培养物
2、染色剂
吕氏碱性美蓝染液
齐氏石碳酸复红染液
实验材料
涂片
干燥
固定
染色
水洗
干燥
镜检
操作步骤
四、实验步骤
无菌操作
1、涂片
取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作从枯草杆菌（1d）斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。
如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。
Notes: 1） 载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水和取菌不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
操作步骤（continued）
菌悬液
涂片
干燥
滴加无菌水
固定
取菌苔
涂片
操作步骤（continued）
3、固定
固定的目的：
1）使细胞质凝固，以固定细胞形态；
2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。
固定方法：
热固定：涂面朝上，通过火焰数次
注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，
否则会改变甚至破坏细胞形态
操作步骤（continued）
2、干燥 室温自然干燥
4、染色
◇ 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。
◇ 美蓝染色1-2min；石碳酸复红染色约1min。
操作步骤（continued）
5、水洗
倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。
Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。
7、镜检
细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。
操作步骤（continued）
6、干燥
自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。