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（一）DNA克隆
克隆（clone）：
来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。
克隆化（cloning）：
获取同一拷贝的过程，即无性繁殖。
分子克隆（DNA克隆）
细胞克隆
个体克隆（动物或植物）
DNA克隆：
应用酶学的方法，在体外将各种来源的
DNA与载体DNA结合成具有自我复制能力的
DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞，
筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行
扩增、提取获得大量同一DNA分子。又称基
因克隆或重组DNA。
基因工程：
实现基因克隆所采用的方法及相关
的工作，又称为重组DNA技术 (recom-binant DNA technology)。
（二）工具酶
限制性核酸内切酶
DNA聚合酶I
逆转录酶
DNA连接酶
碱性磷酸酶
末端转移酶
Taq DNA聚合酶
限制性核酸内切酶
（restriction endonuclease）
识别DNA的特异序列，并在识别位
点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
是细菌内存在的保护性酶。分为I、II、III三类。II类酶识别序列特点为回
文结构。
··· ··· GGATCC ··· ···
··· ··· CCTAGG ··· ···
限制性核酸内切酶作用后产生两种末端：
钝性末端(blunt end) 粘性末端(sticky end)
5´-端突出
粘性末端
3´-端突出
限制性核酸内切酶识别序列长度为4~8个bp。
不同酶切产生的相同粘性末端称配伍末端（compatible end），可用连接酶连接。
（三）目的基因
应用重组DNA技术所要分离、获得的基因。
1. cDNA(complementary DNA):是指经反转
录合成的，与RNA互补的单链DNA。以单链cDNA为模板，经聚合反应可合成双链cDNA。
2. 基因组DNA（genomic DNA）：是指代
表一个细胞或生物体整套遗传信息（染色体
及线粒体）的所有DNA序列。
（四）基因载体（vector）
能携带目的基因，实现无性繁殖所采用的
可独立复制的完整DNA分子。又称克隆载体。其中为表达出蛋白质设计的载体又称表达载
体。
常用的载体：
质粒、噬菌体DNA、病毒DNA
载体的选择标准：
能自主复制；
具有两个以上的遗传标记物，便于
重组体的筛选和鉴定；
有克隆位点（外源DNA插入点），
常具有多个单一酶切位点，称为多
克隆位点；
分子量小，以容纳较大的外源DNA。