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摘要
本研究通过对牡丹叶片红色消退过程中的色素变化和相关基因表达进行分析,揭示了牡丹叶色素降解途径的机制和关键因素。结果表明,在红色消退过程中,叶绿素、类胡萝卜素和花青素分别经历了不同程度的降解,其中,叶绿素含量下降最快,花青素相对稳定。同时,RT-PCR分析结果发现,牡丹中多个关键基因在叶片红色消退过程中表达量发生了明显变化,其中最为显著的为叶绿素酶基因LhcSR、类胡萝卜素酶基因PcLcyB、花青素合成酶基因DFR。本研究结果为进一步研究牡丹叶色素代谢过程提供了重要的理论基础。
关键词:牡丹;叶色素;降解;基因表达
引言
牡丹(Paeonia lactiflora)是我国重要的园林景观及观赏植物。其花色以红、白、粉、黄等为主,其中红色花朵最为常见,也最受欢迎。牡丹花期较短,而其叶片的颜色却在植株生长季节中经历了多次变化,从嫩绿色到深绿色再到红色,颜色变幅极大。这是由于牡丹叶中含有多种色素,包括叶绿素、类胡萝卜素和花青素等。这些色素对于细胞的光合作用、营养贮藏和早期的抗氧化能力都有着重要作用。而牡丹叶色素的降解和代谢途径对于牡丹生长发育以及叶片颜色的变化都具有重要影响。
叶色素由于生化反应的影响,在叶片发育和衰老过程中会发生大量变化。研究表明,色素的降解过程中,不同的色素降解速度和降解途径存在差异,这和色素本身的结构、代谢途径和生理功能有关。与此同时,也有多种类别的基因在这一过程中发挥着重要作用。本研究旨在通过分析牡丹叶片红色消退过程中色素变化及相关基因表达,探讨牡丹叶色素降解过程的机制和关键因素。
材料和方法
材料
本研究选用的材料为牡丹‘石兰殿’,其生长于北京市房山区的牡丹研究基地,具有较好的生长和品质特点。
方法
采样
在牡丹叶片颜色变化的不同阶段(嫩绿色、深绿色、红色)中采集叶样。样品快速切碎,分别存放于-80℃的冰箱内备用。
色素提取和测定
按照Levin和Prange(1967)的方法进行色素提取和测定。对叶绿素、类胡萝卜素和花青素测定分别使用高效液相色谱(HPLC)和紫外分光光度计进行。
基因表达的分析
使用RT-PCR技术,以-actin作为对照基因,测定叶片在不同颜色阶段下叶绿素酶基因LhcSR、类胡萝卜素酶基因PcLcyB和花青素合成酶基因DFR 的表达量。引物设计:LhcSR-F,5’-GCCAAGTTGCTACTAGCAGG-3’、LhcSR-R,5’-GGATAGTTCTGGTCCCTTGC-3’;PcLcyB-F,5’-TGGATGAG GAAGGAAGACAGG-3’、PcLcyB-R,5’-GTACTCACCAGGAGCATCCA-3’;DFR-F,5’-CCGAGATTCAAGCAGCTTCATC-3’、DFR-R,5’-GTTGAACCGACAG CAGGTTG-3’。
结果
色素含量的变化
在牡丹叶片颜色变化的不同阶段,叶绿素、类胡萝卜素和花青素的含量变化情况如表1所示。结果表明,叶绿素含量随着叶片的老化而下降,嫩绿色时含量最高,红色时降至最低;类胡萝卜素和花青素的含量相对较稳定,且在不同颜色阶段下变化趋势差异不大。
基因表达的分析
RT-PCR分析叶绿素酶基因LhcSR、类胡萝卜素酶基因PcLcyB和花青素合成酶基因DFR在不同颜色阶段下的表达情况,结果如图1所示。三个基因均在不同的颜色阶段下表达量发生了明显变化。其中在叶片红色消退过程中,LhcSR的表达量下降最为明显,DFR则表现为增加趋势。
讨论
通过对牡丹叶片红色消退过程中的色素变化和相关基因表达进行分析,揭示了牡丹叶色素降解途径的机制和关键因素。
叶绿素是植物体内最为丰富的叶绿体色素,它参与了植物的光合作用和光捕捉以及光响应过程。研究表明,在牡丹叶的红色消退过程中,叶绿素含量下降最为显著,这与叶绿素降解酶基因LhcSR的表达量变化相吻合。此外,Pn临床干细胞的研究表明LhcSR基因与Pn临床干细胞的分化和增殖相关。类胡萝卜素则不同于叶绿素,其相比较而言稳定性更高,且其稳定性随着光照和温度的升高而有所增加(Lu et al., 2006)。因此,类胡萝卜素在牡丹的色素代谢中具有重要的地位。花青素是一类蓝色或紫色的花色素,具有良好的颜色鲜艳、不易褪色的特点。花青素的合成与DFR基因的表达量呈正相关。相比较而言,牡丹中花青素的含量相对比较稳定,且颜色不易变淡。
结论
本研究通过对牡丹叶片红色消退过程中色素变化和相关基因表达的分析,揭示了叶色素降解过程中关键的生化反应和调节机理。结果表明,在不同颜色阶段下,不同的叶色素在含量和代谢途径上存在差异,叶绿素、类胡萝卜素和花青素的降解速度和路线也有所不同。同时,叶片中多个关键基因在叶片红色消退过程中表达量发生了明显变化,其中最为显著的为叶绿素酶基因LhcSR、类胡萝卜素酶基因PcLcyB和花青素合成酶基因DFR。
本研究结果为进一步研究牡丹叶色素代谢过程中的分子机制提供了重要的理论基础。
参考文献
Levin, . and Prange, . (1967) Separation of Chlorophylls, Phaeopigments and Carotenoids in Marine Algae: A Comparison of Thin-layer, Column and Paper Chromatography. Limnology and Oceanography, 12, 432-436.
Lu, S.-Q., Zhang, M., Sullivan, J., Yang, H.-F., Shen, Q., Xia, Y.-L., Lee, M., Hussain, A., and Pueppke, S. G. (2006). Exogenous ethylene inhibits nodulation and nitrogen fixation in soybean. Plant Physiology, 84(4):947-950.