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第三章 细胞培养根本技术
王 云
动脉粥样硬化研究所
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细胞培养的优点
活细胞：长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构和生命活动
可控制：
选择特定的细胞种类、性质、阶段
可控制调节条件：物理、化学、生物等
可采用各种研究技术、记录方法
样品均一性：来源于同一组织同一种细胞
经济、规模
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局限性
人工模拟的条件和体内实际情况仍不完全相同
缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响
体外培养的细胞生活在缺乏动态平衡的环境环境中，必然发生变化。
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本章主要内容
细胞培养的根本操作技术
原代培养(primary culture)
传代培养(subculture)
体外培养细胞的影响因素
细胞培养污染及对策
培养细胞的生长测定方法
细胞冻存和复苏
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细胞培养中的常用术语
组织培养(Tissue Culture)： 指的是从体内取出组织，模拟体内生理环境，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
器官培养〔Organ Culture〕： 培养的是器官的原基、器官的一局部或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。
细胞培养(Cell Culture)： 培养物是单个细胞和细胞群。
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细胞培养中的常用术语
原代培养〔primary culture〕：从体内取出细胞或组织的第一次培养。
传代〔passage〕也称再培养。无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。也称再培养。
细胞系〔cell line〕：原代培养物经首次传代成功后即为细胞系
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细胞培养中的常用术语
细胞株〔cell strain〕：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物称细胞株。
集合〔confluent〕：细胞相互连接成片占据所有底物面积。
接触抑制〔contact inhibition〕：细胞集合相互接触后失去运动的现象
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一、细胞培养根本操作技术
由于体外培养的
细胞没有抗感染能力，
因此防污染是决定培
养成功的首要条件。
一切操作需要保证
无菌和有条不紊。
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培养前准备
制定好实验方案和操作程序
有关数据的计算要事先做好。
准备各种所需器材和物品，清点无误后将其放置在操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。
防止开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染时机。
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消毒
%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专用)，紫外线照射消毒30-50min
超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。
消毒时工作台面上用品布局合理，不要过多或重叠放置，否那么会遮挡射线降低消毒效果。
一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
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