T4连接酶说明书.docx

文档介绍：T4 DNA 连接酶
SinoBio目录号:M001
近岸蛋白质科技有限公司
地址:上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路720号2号楼电话:[phone] 邮箱:product@
产品描述:
T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的连接反应,也能催化双链RNA 5'-磷酸末端和3'-羟基末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。以上反应均需消耗ATP。
保存温度:-20oC 产品包装:
T4 DNA连接酶(350U/μl) 2×Quick Ligation Buffer 10×T4 DNA Ligation Buffer 80μl 1ml 1ml
特点:
随酶附带10×T4 DNA Ligation Buffer及独特配方的2× Quick Ligation Buffer提供给您更多的选择:而使用10×T4 DNA Ligation Buffer,16℃过夜连接可获得最高的连接效率; 使用快连buffer在室温(25℃)下,仅需5分钟即可完成粘性末端或平滑末端DN***段的连接反应。
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:
在20 ml的连接反应体系中, 6 mg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时, 有90%以上的DN***段被连接所需要的酶量定义为1个单位。
产品用途:
DN***段和载体DNA的连接。(参见欣百诺实验方案)。 DN***段和Linker或Adaptor DNA的连接。
快速连接步骤:
1) 取50 ng载体和3倍摩尔量的插入片段,用双蒸水调整总体积为10 μl。 2)加入10 μl 2×Quick Ligation Buffer,混匀。 3)-1 μl T4 DNA连接酶,充分但轻柔混匀(切勿剧烈震荡,可能导致酶部分失活)。 4)稍事离心,置于室温(25℃) 作用5分钟。 5)冰上放置,转化(如不立即进行转化实验请冻存于-20℃)
使用建议:
粘末端的连接反应: 插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要,此比例在2-6之间最好,低于2:1就会导致较低的连接效率,高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段 DNA浓度及分子大小来计算。平滑末端的连接反应: 平滑末端的连接反应与突出末端相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。进行平滑末端的连接反应时,可提高DNA浓度,将使用酶量增加到突出末端量的2~5倍左右。向粘粒或噬菌体进行连接反应:可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1,同时增大DNA浓度以