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2009年3月
光度测定法BET检查技术
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202X
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动态比浊法BET
光度测定法方法学分类
终点比色法BET
光度测定法原理
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1、光度测定法方法学分类
01
02
03
光度测定法（定量法检测）
显色法
浊度法
(比色法)
终点浊度法
终点显色法
动态浊度法
动态显色法
(比浊法)
光电转换原理
光度测定法是利用鲎试剂与内毒素的混合物在反应过程的透光度变化与内毒素浓度的关系来定量检测内毒素的一种方法。
当一束光线进入如下光电转换装置时，该装置将产生电流I，我们称I为透光强度。
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入射光
反应混合物
透射光
光电池
I
透光容器
2、光度测定法原理
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T(分)
Is
It
Ie
I
设：初始时的透光强度为Is，某时刻的透光强度为It 定义1：透光度（Rt）： Rt=It/Is(%)
初始时It=Is，Rt=100%，Rt曲线变化趋势是由高至低。
定义2： 吸光度(OD)：
OD= -lg(It/Is)
初始时It=Is，OD=0，OD曲线变化趋势是由低至升高。
选择不同的参数(Rt或OD)将得到不同变化趋势的动态曲线。
以透光度（Rt）为纵座标，时间（T）为横座标，把TAL与内毒素反应引起反应混合液透光度的变化连续地描绘在座标系中，便得到该反应的动态曲线如图：
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Rt（%）
T（分）
动态曲线
100
孕育期
反应期
结束
TAL与内毒素反应的动态曲线(Rt-T曲线)
以吸光度（OD）为纵座标，时间（T）为横座标，把TAL与内毒素反应引起反应混合液吸光度的变化连续地描绘在座标系中，便得到该反应的动态曲线如图：
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OD
T（分）
动态曲线
0
孕育期
反应期
结束
TAL与内毒素反应的动态曲线(OD-T曲线)
把标准内毒素制备成三个浓度C1、C2、C3（ C1>C2>C3 ），分别与TAL反应，描绘出反应的动态曲线如下图：
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C3
Rt（%）
T（分）
C2
C1
分析动态曲线可看出：
内毒素浓度越高，孕育期越短；
内毒素浓度越高，反应期曲线越陡；
内毒素浓度越高，进入结束期越快。
动态曲线的特点
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C3
100
Rt（%）
T（分）
C2
C1
相关变量： 内毒素浓度(C) 透光度(Rt或OD) 反应时间(T)
光度测定法BET试验的相关变量
固定透光度(Rt)，建立内毒素浓度与反应时间关系的标准曲线（C-T曲线），用供试品的反应时间比对标准曲线，得出供试品的内毒素浓度。这里的反应时间是指反应混合液的透光度到达预设透光度值（Rt）的时间。
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回归分析
Rt%
预设透光度值R0
T1
T2
T3
92
100
T(分)
C1
C2
C3
LgT=b-kLgC
LgT
T3
T2
T1
C3
C2
C1
LgC
（1）建立标准曲线
1）动态法原理