文档介绍：四川大学
硕士学位论文激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶联产工艺的研究姓名:罗灿
申请学位级别:硕士专业:微生物与生化药学指导教师:余蓉
20070501
四川人学硕士学位论文胰酶中三酶联产工艺的研究
激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶联产工艺的研究
微生物与生化药学专、lk
研究生罗灿指导教师余蓉
摘要胰酶是一种常用的医药、工业用原料药,其成本低廉易于获取,且所含活
性物质种类丰富,可以作为基础原料从中提取多种生化药品,如胰激肽释放酶、弹性蛋白酶、核糖核酸酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶,羧肽酶等等,其中激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶三种药用酶不但是目前临床常用药和现代生物学研究中的重要工具,而且价格昂贵,因此以胰酶为原料提取该三酶具有巨大的经济效益和应用价值。但是由于胰酶为多种酶的混合物,每种酶的纯度很低,许多酶又具有相似的分子结构和理化性质,因此往往在提取一种酶的同时,其它酶被当作杂质处理掉了,这就导致了胰酶中三种以上酶联产的工艺极为少见,而且已有工艺都有各自的不足。随着酶分离纯化技术的发展,人们迫切需要建立新的联产工艺以适应工业化的需求。
本研究考察了各种纯化方法,将离子交换层析、亲和层析和疏水层析三种分离纯化法相结合,建立了激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶三酶的联产工艺: ,粗提液直接上DEAE一琼脂糖快胶柱吸附(平衡缓冲液:—HoAc缓冲液(),洗脱缓冲液:
—HoAc缓冲液()~)分两步沈脱,收集激肽释放酶的洗脱峰;DEAE一琼脂糖快胶的未吸附液上亲和层析柱分批吸附(平衡缓冲液:—Hcl缓冲液(),洗脱液: 溶液),一次洗脱,收集胰蛋白酶洗脱峰;最后,亲和层析未吸附液用30%~
80%硫酸铵分级盐析处理,沉淀溶解后用上苯基一琼脂糖侠胶吸附(平衡缓冲液:—HAc缓冲液(pH4,5)含lmol/L(NH。)。SO。,洗脱缓冲液:
—HAc缓冲液()含O~(Nit。):SO。),分两步洗脱,
收集糜蛋白酶的洗脱峰。
婴型查兰堡主兰竺堡塞 璧堕!三堕壁主三茎塑堡塞实验结果表明,该工艺制备的三酶比活和活性回收率较高:激肽释放酶比活为550u/mg,收率73%;胰蛋白酶比活12500u/mg,为药典标准5倍,收率
79%;糜蛋白酶比活8000u/mg,为药典标准lO倍,收率80%。经SOS—PAGE 电泳检测,三酶所含杂带较少。该工艺操作简便快速、成本低,重复性好,具有工业化生产的潜力。
关键词:胰酶,激肽释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶
四川大学硕士学位论文胰酶9--酶联产工艺的研究
Research of coorperative production technology of kallikrein,trypsin and chymotrypsin
Microbic And Biochemical Pharmacy
Postgraduate Luo Can Supervisor Yu Rong
abstract
Pancreatin is a colmnon material drug for medical treatment and a biochemistry reagent in industry,it costs low and easy to are three iⅢportant enzymes in pancreatin: kaltikrein,trypsin and
chymotrypsin,they are all materials for modern biological research and
have valuable clinic iS huge economically and appIicably valuable to extract the three high cost enzymes from pancreatin is a mixtrure of various enzymes。each enzyme has a low purity and many enzymes have similar molecule structure and physicochemical
properties,when extracting one enzyme,it iS easy to abandon the