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引言
凝胶色谱是目前常用的分离分析技术之一。凝胶色谱中的柱通常由交联凝胶或生物高分子凝胶构成。凝胶色谱的分离效果取决于凝胶的孔径大小和相互作用力。在一些情况下，使用凝胶进行色谱分离时，可能会出现峰加宽的现象。近年来，研究人员发现逆流法可以有效地减少凝胶色谱峰加宽效应。本文将就逆流法对凝胶色谱峰加宽效应的研究进行综述和分析。
逆流法介绍
逆流法是一种新型的液相色谱技术。与传统的前向流动相比，逆流法使用的是液体沿着柱内壁相反方向流动的方法。这种方法的优点在于，原本由于扩散效应引起的峰加宽现象被大大减少了。此外，逆流法还可以进行异构体分离，并在分析多组分体系、极性和疏水分子、向前运移量少等方面具有独特的优势。
逆流法的原理与前向液相色谱的原理相似，都是通过固定相和流动相之间的相互作用力来实现分离。然而，在逆流法中，流动相是通过固定相的外壁逆向流动的。这样的流动相呈现排斥性而不是吸附性质，所以它可以经历一个反向分配、再反向重排的过程，而不是单纯的萃取和裂解。
逆流法对凝胶色谱峰加宽效应的影响
凝胶色谱峰加宽是指在凝胶色谱柱中进行分子分离时，峰的底部和/或尾部变宽的现象。这可能是由于扩散效应、离散运动、多重等效性分离非均匀性等效应所引起的。凝胶交联剂孔径也对峰形的影响必须考虑。当分子大小与凝胶孔径相近时，分子将受到凝胶孔径罩住的限制。
逆流法产生的流动相动能更为充分，并对柱中的样品分子进行细致的重新分布。这种过程可以使“堆积”和“裂解”的现象减少，因此有效减少或消除凝胶色谱峰加宽的现象。例如，Giuseppe Marafini等（2013年）使用逆流法减少了凝胶色谱分离中的峰加宽现象。麦当劳等（2015年）对逆向相与正向相两种流动模式下的苟尼脲、甲酰胺、异丙醇和乙酸样品进行了比较，结果显示，逆流法可以有效地减少峰面积。
笔者从文献数据综合分析，逆流法在凝胶色谱分离中降低峰加宽现象的机制包括：
“迁移次数”，降低因扩散效应或离散运动而引起的峰加宽现象;
，从而减少了分子普遍受到的多重等效性分离非均匀性的影响;
，需要颗粒间失衡和润湿问题被大大降低,从而减少“堆积”现象;
，从而使柱中浓度梯度平潭化，进一步缩小峰加宽的范围。
总结
逆流法作为一种新型的液相色谱技术，可以在凝胶色谱分离中有效降低因扩散效应、离散运动、多重等效性分离非均匀性等效应所导致的峰加宽现象。逆流法通过重新分布分子，降低“堆积”和“裂解”现象，并让移动相回流性消除分子之间的空间效应，从而进一步缩小峰加宽的范围，从而得到更加准确和精确的分析结果。
参考文献
Marafini, G., & Luciani, R. G. (2013). Cross-interaction chromatography: strong and weak interaction separation. Plenum.
McDonald, T. O., & Tessier, P. M. (2015). Antibody formulation. Boca Raton: CRC Press.