PCR扩增目的基因.ppt

文档介绍：PCR扩增目的基因
薛亚男
生药0911
目录
实验目的
实验原理
实验器材
实验步骤
注意事项
一实验目的
1、掌握PCR扩增DNA的技术原理
2、学****PCR扩增仪的使用方法
二实验原理
PCR是一项特异性DNA序列的体外酶促合成方法,是利用2个寡聚合苷酸作为引物与对应DNA链的目的区域的侧翼杂交,经过模板变性作用,引物退火和耐热DNA聚合酶促引物延伸,周而复始地复制产生特定片段,使其在数量上呈指数增加。
三实验器材
仪器:
PCR扩增仪、台式高速离心机、微量移液器、经高压灭菌后的Eppendorf管
材料与试剂:
1)模板DNA():用牙签挑取单菌落悬浮到 50μL的裂解液中(裂解液1%TritonX-100,20mmol/L Tris-HCL ,2mmol/EDTA),95℃温水浴10min,10000rpm 5min,取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。
2)TaqDNA聚合酶(5U/μL),10×扩增缓冲液dNTP(1mmol/L)
3)引物(100pmol/L)设计并合成与目的DNA互补的引物。
四实验步骤
1、PCR反应溶液的准备
1)按以下次序::10×扩增缓冲液10μL;4×dNTP s(包括4种dDTP)8μL;引物11μL;引物21μL;模板DNA1μL(10ng);TaqDNA聚合酶1μL();加水至终体积100μL。
2)用手指轻弹Eppendorf管底部,使溶液混匀。在台式离心机中离心2s以集中溶液于管底。
3)加石蜡油50μL封住溶液表面。
2、PCR扩增