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受控状态：R受控□非受控
版本:A/0
发放编号：
实验室水质检验作业指导书
编制：maszhc
审核：×××
批准：×××
南京××可嘉食品有限公司
2025年3月31日发布 2025年4月31日实施
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目录
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水质取样检验作业指导书
为确保水质检验检测结果的准确性、提高工作效率、保障人员安全以及满足法规要求，有助于提升本实验室水质检测检验质量，规定了本实验室生产用水检测的方法和执行标准。
适用于本实验室水处理工序设备运行过程水质监控及水处理系统清洗消毒结果验证等。
：水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数。
：指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
：用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，℃仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。
：是指水中能够接受[H+]离子即与强酸发生中和反应的物质总量。
：水中钙、镁离子和其它金属离子的总含量。因其它金属离子的含量很少，一般情况下，总硬度表示钙、镁离子的含量。
质检部负责水质检测和生产部门作业监控
生产部负责设备设施及相应工序的操作
样本采集与编号
样本登记与信息录入
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预处理阶段
（过滤、分装、保存）
检测项目分析
（1）理化检测项目
（pH/浑浊度/余氯等）
微生物检测
（菌落总数/大肠杆菌）
数据记录与分析
（仪器数据/人工复核）
结果判定
不合格
合格
复检流程启动
（重新检测）
生成检测报告
（电子、纸质）
生成检测报告
（电子、纸质）
异常排查
更新记录并重新判定
检测报告审核与签发
样本保存与归档
（按周期销毁/留样）
报告发送与存档
（客户/监管部门）
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、工艺水水质感官：无色、无味、无肉眼可见杂质；
：
项目
pH
碱度
mg/l
硬度
mg/l
井水浊度
NTU
自来水浊度
NTU
菌落总数
cfu/ml
大肠菌群
MPN/100ml
余氯
mg/l
标准
-
≤150
≤450
≤3
≤1
≤100
不得检出
-
注：其中硬度、碱度均以CaCO3计
：
项目
pH
碱度
mg/l
硬度
mg/l
浊度
NTU
电导率
μs/cm
余氯
mg/l
菌落总数
cfu/ml
大肠菌群
MPN/100ml
标准
-
≤75
≤75
≤1
≤200
≤
≤100
不得检出
注：其中硬度、碱度均以CaCO3计
：
，原水（井水或自来水）理化指标检测取样检测频率1次/12小时。
，工艺水理化指标检测取样检测频率1次/2小时。
、工艺水微生物检测取样检测频率1次/1周。
将带塞子的三角瓶（具体视取样点个数）放于高压灭菌锅内121℃灭菌30分钟后备用，再取一定数量的棉球（具体视取样点个数）放于塑料烧杯中，加入75%乙醇液至棉球全部浸没，浸泡30分钟以上（即酒精棉球）待用，同时将取样用的镊子（取样端）也放入上述75%乙醇液中浸泡消毒备用。
打开取样阀（开启度根据取样适合为宜）排水3～5分钟,取样前先用消毒后的镊子取一酒精棉球将取样口仔细擦试，再换取一酒精棉球将取样口重新擦试，然后用灭菌后的三角瓶取水样200 ml左右，迅速盖上塞子，注意操作过程中手不要接触到瓶口内侧和塞子下端，以免造成操作上的污染，同时清理用过的
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酒精棉球,将样品带回微生物室待检。
样品的处理
取回的水样必须在2小时内进行菌落总数和大肠菌群的检验，以免过长时间的放置造成检验结果的不准。
（平皿计数法）
（1）培养基与试剂: 营养琼脂
成分（g/L）： 蛋白胨 10g，氯化钠 5g，牛肉膏粉 3g，琼脂 15g。
配制：称取本品33克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
（2）仪器
高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、培养箱36±1℃、电炉、天平、冰箱、放大镜、pH计或精密pH试纸、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。
（3）检验步骤
以无菌操作方法用灭菌刻度吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1℃培养箱内培养48h,进行菌落计数，即为水样1ml中的菌落总数。
（4）菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
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若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
（5）不同稀释度的选择及报告方法
① 首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则讲该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）。
② 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30-300之间则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表1中实例3）。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表1中实例4）。
③ 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中实例5）。
④ 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例6）。
⑤ 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例7）。
⑥ 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。
⑦ 如果所有平板上都有菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个拼版1cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数， cm2，在乘其稀释倍数坐报告。
⑧ 菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零也可用10的指数来表示（见表1“报告方式“栏）。
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
实例
不同稀释度的平均菌落数
两个稀释度菌落数之比
菌落总数(cfu/ml)
报告方式/(cfu/ml)
10-1
10-2
10-3
1
1365
164
20
—
16400
×104
2
2760
295
46
37750
×104
3
2890
271
60
27100
×104
4
150
30
8
2
1500
×103
6
5
多不可计
1650
513
—
513000
×105
6
27
11
5
—
270
×102
7
多不可计
305
12
—
30500
×104
（多管发酵法）
（1）培养基与试剂
1）乳糖胆盐发酵培养基
成分（g/l）：蛋白胨（20g）、乳糖（10g）、猪胆盐（5g）、溴甲酚紫（）；
配制方法：称取乳糖胆盐发酵培养基35g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115℃高压灭菌15min，备用；
2）伊红美蓝琼脂
成分：胨（10g）、牛肉浸粉（3g）、氯化钠（5g）、 曙红钠（）、亚甲蓝（）、乳糖（10g）、琼脂（14g）；
配制方法：，加入1000ML蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌,20min后备用；
3）革兰氏染色液
① 结晶紫染色液
：
结晶紫 1g；
乙醇（95%，体积分数） 20mL；
草酸铵水溶液（10g/L） 80mL。
：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
② 革兰氏碘液
：
碘 1g；
碘化钾 2g；
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蒸馏水 300Ml。
：将碘和碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
③ 脱色剂
乙醇（95%，体积分数）。
④ 沙黄复染液
：
沙黄 ；
乙醇（95%，体积分数） 10mL；
蒸馏水 90mL。
：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。
⑤ 染色法
将培养18h-24h的培养物涂片。
将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min,水洗。
滴加革兰氏碘液，作用1min,水洗。
滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s水洗。
滴加复染剂，复染1min,水洗，待干，镜检。
(2)仪器
培养箱：36±1℃、冰箱：0℃-4℃、天平、显微镜、平皿：直径为90mm、试管、分度吸。
管：1mL,10mL、锥形瓶、小导管、载玻片。
(3)检测步骤
1)乳糖发酵试验
取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白冻培养液中，取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白冻培养液中，另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1mL（）注入到10mL单料乳糖蛋白胨营养液中，每一种稀释度接种5管。
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