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【摘要】 目的探讨口虾蛄提取物对体外人鼻咽癌细胞系CNE-2Z转移潜能的影响。方法用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及侵袭实验检测口虾蛄提取物对CNE-2Z细胞粘附、运动及侵袭能力的影响；免疫细胞化学法检测其对MMP-2、MMP-9及CD44v6蛋白表达的影响。结果口虾蛄提取物能以量-效方式抑制CNE-2Z细胞体外运动及侵袭能力，但对CNE-2Z细胞-基质粘附能力无影响。且口虾蛄提取物能降低MMP-2、MMP-9及CD44v6蛋白强阳性表达率。结论口虾蛄提取物可抑制体外CNE-2Z细胞的运动及侵袭能力,其机制可能与下调CD44v6、MMP-9和MMP-2蛋白表达有关。
【关键词】 口虾蛄 口虾蛄提取物 鼻咽肿瘤 肿瘤转移
近年来，研究发现海绵、海藻及珊瑚等多种海洋生物均含丰富的抗瘤活性物质［1］，提示从海洋生物筛选抗肿瘤新药具有广阔的前景。口虾蛄(Oratosquilla)，又称濑尿虾，属于节肢动物门，是日常食用的海洋生物之一。目前，有关口虾蛄抗肿瘤的报道甚少。本课题组近年研究发现口虾蛄提取物能抑制人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z的生长［2，3］，但能否抗肿瘤侵袭及转移尚不清楚。本文旨在探讨口虾蛄提取物对CNE-2Z细胞转移潜能的抑制作用，为口虾蛄抗肿瘤作用提供实验依据。
1 材料
新鲜口虾蛄购于广东湛江港口，Matrigel及DBA显色剂为福州迈新生物技术公司产品。
CNE-2Z为人低分化鼻咽癌细胞系,由广东院肿瘤研究所提供。
2 方法
口虾蛄有效成分提取与配制新鲜口虾蛄暴晒干后粉碎成粉末，用95%乙醇浸泡3次，每次浸泡液过滤混匀在56℃蒸发提纯。提纯物呈膏状，每克药物相当于生药 g。提取物用二甲基亚砜配成1 000 g · L-1，4℃保存，临用时用培养液稀释成所需浓度，以下实验均分4组：溶剂对照组、口虾蛄提取物低浓度组、口虾蛄提取物中浓度组及口虾蛄提取物高浓度组。
细胞-基质粘附实验Matrigel按 μg/孔铺于96孔培养板中，风干过夜。CNE-2Z细胞常规培养，以每孔4×104/100 μl接种，并加入不同浓度的口虾蛄提取物，每组设12个平行孔，培养8 h后倒掉培养液，结晶紫100μl/孔染色10 min，PBS洗涤3次。加入醋酸乙醇100 μl/孔，酶标仪测定A570 nm值。实验重复2次。
细胞侵袭及运动实验Transwell上室腔内加入稀释好的Matrigel。收集CNE-2Z细胞，用含1%牛血清白蛋白的RPMI 1640制成1×106/ml细胞悬液，以100 μl/室加入上室腔，同时加入不同浓度的口虾蛄提取物，每组设平行小室3个，小室浸于24孔板的条件培养基中培养24 h，取小室，甲醇∶丙酮固定10 min，擦去未穿膜的细胞，HE染色，光学显微镜下随机选择5个视野，计数细胞数目，取均值。运动试验除不铺Matrigel外，其余步骤相同。
免疫细胞化学法①CNE-2Z细胞接种在一次性塑料培养皿中，同时加入不同浓度的口虾蛄提取物，常规培养24 h后弃培养液，用PBS冲洗3次，冷丙酮：甲醇固定10min，晾干。②免疫组化染色：参照S-P试剂盒说明。③结果观察：每组选用上下左右中五个区域，记数500个细胞，胞浆或和胞膜着色淡黄为弱阳性，着色棕黄为阳性，着色棕褐为强阳性，无着色为阴性。
学分析用统计学SPSS for Window 中单因素方差分析One-Way ANOVA(Post Hoc Test:LSD test) 及R×C Table Descriptive statistics (Crosstabs,Chi-square)。
3 结果
粘附实验结果不同浓度口虾蛄提取物组OD值变化不大。溶剂对照组、口虾蛄提取物，， mg · L-1组OD值分别为±，±，±及±。组间差异无学意义。
细胞运动实验结果随口虾蛄提取物浓度的增高，穿PVPF膜的细胞数渐减少，呈量-效关系。溶剂对照组及口虾蛄提取物低、中、高浓度组穿膜细胞数分别为±，±，±及±。组间差异有显着性。
细胞侵袭实验结果随口虾蛄提取物浓度的增高，穿PVPF膜的细胞数也渐减少，呈量-效关系。溶剂对照组及口虾蛄提取物低、中、高浓度组侵袭细胞数分别为，，及。组间差异有显着性，提示其对CNE-2Z细胞-基质粘附能力可能无抑制作用。细胞运动实验结果发现随着口虾蛄提取物浓度的增高，穿过PVPF膜的CNE-2Z细胞数渐减少，呈量-效关系家族成员中的Ⅳ型胶原酶与恶性肿瘤侵袭及转移关系最密切，是近年研究之一。目前发现Ⅳ型胶原酶有两种:72KD型和92KD型Ⅳ型胶原酶，即MMP-2及MMP-9，两者的过度表达与肺、前列腺及乳腺等多种器官恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关。有研究表明MMP-9和MMP-2与鼻咽癌侵袭转移有关［7，8］。本实验结果显示MMP-2及MMP-9蛋白表达也随口虾蛄提取物浓度增高而降低，呈量效关系（P＜)，提示了口虾蛄提取物可抑制MMP-2及MMP-9表达，从而降低CNE-2Z细胞的侵袭能力。
综上所述，口虾蛄提取物可能同时抑制了CD44v6、MMP-9和MMP-2蛋白表达而降低CNE-2Z细胞的运动及侵袭能力，从而抑制了CNE-2Z细胞的转移潜能。由此可见，口虾蛄提取物中可能含有抗鼻咽癌侵袭及转移的活性成分，至于其起作用的具体活性成分是什么，有待进一步的研究。
【 参考 文献 】
［1］T. Luke S, Eric A, Kerry MP, et al. Marine natural products as anticancer drugs ［J］. Mol Cancer Ther，2005,4(2):333.
［2］顾帝水，黄培春，孔 霞，［J］. 中西医结合杂志,2005,14(14):1825.
［3］叶才果，潘海燕，黄培春，［J］. 时珍国医国药,2008,19(12):2965.
［4］Kainz C , Tempfer C , Kohlberger P , et al . Immunohistochemical detection of adhesion molecule CD44 splice variants in lymph node metastases of cervical cancer［J］. Int J Cancer , 1997，74 : 185.
［5］卓明英, 杨 军, 林 昶，等. CD44v6基因蛋白在鼻咽癌的表达及意义［J］. 肿瘤学杂志,2001,6(1):25,31.
［6］Afify A, Purnell P, Nguyen L. Role of CD44s and CD44v6 on human breast cancer cell adhesion, migration, and invasion［J］. Exp Mol Pathol，2009, 86(2):95.
［7］Zhang XX, Guo Y, Ye Q, et al. Study of the relation between MMP2、MMP9 and nasopharyngeal carcinoma［J］. Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi, 1999, 13(8): 356.
［8］Horikawa T, Yoshizaki T, Sheen TS, et al. Association of latent membrane protn 1 and matrix-metalloproteinase 9 with metastasis in nasopharyngeal carcinoma［J］. Cancer, 2000, 89(4):715