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（优选）药物分离纯化技术制备色谱分离技术
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制备色谱技术
常规制备薄层色谱PTLC
薄层板制备
为了增大上样量，增加了吸附剂用量。
固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶
支撑：玻璃板或铝箔
平均25m, 5~40 m
硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P
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制备色谱技术
硅胶粒径范围影响：
越细越均匀，分离度越高，但？
粒径范围宽，分离效率低，怎么办？
------薄层厚度的渐变
薄层厚度从底部到前沿逐渐增加，这样展开剂的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保持较窄的谱带。
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制备色谱技术
薄层板的制作方法：
常采用湿法：平铺法和涂铺法。
混合
平铺
涂铺器
自然干燥一夜
105-120℃活化
黏合剂
硅胶
煅石膏
或羧甲基纤维素钠水溶液
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制备色谱技术
薄层色谱条件选择
操作参数
流速
展开模式
分离距离
样品量
流动相
选择性
溶剂强度
黏度
展开缸类型
薄层板和展开缸空腔体积比值
温度
蒸气相
固定相
薄层厚度
颗粒大小
质量
开放型
操作不连续
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常用溶剂
(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等；
(2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等；
(3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等；
(4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等；
(5)偶极作用溶剂：二氯甲烷
(6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。
制备色谱技术
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制备色谱技术
上样和展开
先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质；
低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等），且溶剂极性尽可能小。
样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，5-10%；
带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。？
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制备色谱技术
样品检测
有色物质直接观察斑点；
荧光物质在紫外灯下观察；
无色无荧光可在荧光板分离，紫外光下显示暗斑；
喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以用碘蒸气显色，可逆；
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制备色谱技术
常用显色剂：
硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤5分钟，不同有机物显不同的颜色；
%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，背景淡红色；
酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃烤薄层；
5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。
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