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细胞工程第五章细胞融合与单克隆抗体讲课文档.ppt

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第一页,共82页。
细胞融合(cell fusion),是指在离体条件下将不同种生物或同种生物不同类型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。
细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生!
一、细胞融合
第二页,共82页。
2
Muller于1838年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。
Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。
Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。
Lange于1875年第一个观察到脊椎动物(蛙类)的血液细胞发生融合的过程。
Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中发现了细胞合并现象。
第三页,共82页。
3
自发细胞融合
(一)细胞膜融合
受精过程
(二)体内细胞的自发融合
1、肌管的形成
2、胚胎着床
3、巨细胞和破骨细胞的形成
4、肿瘤细胞的融合
破骨细胞
受精
第四页,共82页。
4
第五页,共82页。
5
细胞融合的意义
理论上说任何细胞,都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。
融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制,为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。
体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统,在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组,从而产生新的核外遗传系统。
淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。
第六页,共82页。
6
二、人工诱导细胞融合
诱导细胞融合的主要方法有:
病毒诱导融合
化学融合剂诱导融合
物理方法(电融合)
第七页,共82页。
7
二、人工诱导细胞融合
(一)病毒诱导的细胞融合
有许多种类的病毒能介导细胞融合,如疱疹病毒、副粘液病毒、鸡新城疫病毒等。其中最常用的是灭活的仙台病毒(HVJ),为RNA病毒。
第八页,共82页。
8
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合,形成杂种细胞
(细胞膜具有一定的流动性)
生物法:
灭活的病毒
(丧失感染性、保留抗原结构)
第九页,共82页。
9
(二) 化学方法诱导细胞融合
化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物(如甘油-醋酸酯、油酸、油胺等)、脂质体(如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸等)、钙离子、水溶性高分子化合物(如聚乙二醇)、水溶性蛋白质和多肽(如牛血清白蛋白、多聚L-赖氨酸等),其中最常用的是聚乙二醇(PEG)。
优点是易得,用法简单,融合效果稳定。
第十页,共82页。
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