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实 验 一 氨基酸纸层析
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1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层
析的原理和操作技术；
2、掌握分派层析法；
3、掌握影响分派系数的原因。
一、试验目的：
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层析技术(chromatography 色谱技术)
一、发展史：
层析分离技术在20世纪初就已得到应用：
19用于植物色素的分离,多种色素以不一样的速率流动后形成不一样的色带而被分开，由此得名为“色谱法”
1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体；
1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析；
20世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)。
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二、定义
层析技术是根据被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分派系数等）的不一样，使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中进行分派。
层析的基本概念
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固定相：固定相是层析的一种基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子互换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液）。
流动相：在层析过程中，推进固定相上待分离的物质移动的液体、气体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。
层析的基本概念
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三、层析技术的种类
1、按流动相的状态分类：
（1）液相层析（色谱） （2）气相层析（色谱）；
2、按固定相的使用形式分类：
（1）柱层析（2）纸层析（3）薄层层析；
3、按分离过程所重要根据的物理化学性质分类：
（1）吸附层析 （2）分派层析 （3）离子互换层析
（4）凝胶层析 （5）亲和层析等。
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纸层析法：是以滤纸作为惰性支持物的分派层析。
滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附水作为固定相，一般把有机溶剂作为流动相。
将样品点在滤纸上，进行展层，样品中的多种氨基酸在两相溶剂中不停进行分派。由于它们的分派系数不一样，不一样氨基酸随流动相移动的速率就不一样，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点
二、试验原理:
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分派层析法：
运用物质在两种或两种以上不一样的混合溶剂中的分派系数不一样，而到达分离目的的一种试验措施。 在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分派系数α是一种常数。
溶质在固定相的浓度(Cs)
分配系数α=
溶质在流动相的浓度（Cl)
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溶剂系统： 正丁醇：甲酸：水=15：3：2
固定相：水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用减少形成固定相;
流动相：有机溶剂和滤纸亲和力弱，因此在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相。
由于混合液中多种氨基酸的α值不一样，因此移动速率（即迁移率Rf值）就不一样，从而到达分离的目的。
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移动速率(比移值)：
原点到层析点中心的距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离