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免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。
标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。
标记免疫分析：用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确定待检物。
标记免疫技术－基本概念
常见标记免疫技术
放射免疫技术
酶免疫技术
荧光免疫技术
第一节 放射免疫技术
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大地推动作用。但存在核污染问题。
放射免疫
RIA
以标记抗原与反
应系统中未标记
抗原竞争结合特
异性抗体来测定
待检样品中抗原
量。
免疫放射
IRMA
以过量标记抗体
与抗原非竞争结
合，采用固相免
疫吸附载体分离
游离和结合标记
抗体。
放射受体分析
RRA
放射配体结合
分析RBA
其它
一、放射免疫技术－原理及分类
二、放射免疫技术－常用的放射性核素
125I 3H
射线 γ β
理化性 活泼 差
核素丰度 >90% －
半衰期
标记方法 简单 复杂
标记设备 低廉 昂贵
测量条件 简单 复杂
常用标记核素
标记用的核素有放射γ射线和β射线两大类
γ射线：131I、125I、57Cr和60Co；
β射线：14 C、3 H和32P。
放射性核素的选择首先考虑比活性。
例如125I比活性：×104 GBq/g，
有较长半衰期的14 C比活性： GBq/g。
两者相比，1mol 125I或14 C结合到抗原上， 125I
的敏感度约比14 C大3900倍。又因为125I有合适的半衰期，低能量的γ射线易于标记，
因而125I是目前常用的RIA标记物
125碘-标记物的制备－标记
125I-
化学或酶促反应，将
放射性负电碘离子氧
化成碘原子或正电碘
离子，通过取代反应
置换被标记物分子中
酪氨酸或酪胺残基以
及组胺残基上的氢原
子。
125I或125I+
125I-标记物
（混合物）
Ch-T（氯胺T）、LPO（脂质过氧化物）氧化
取代反应
直接标记法
三、放射免疫技术－标记物制备及鉴定
使用无还原剂的高比放射性碘源
被标记物用量要少
ch-T用量要低
控制总反应体积<200μl
反应时间1-2分钟
弱碱性反应条件