qPCR讲座.ppt

文档介绍：荧光定量PCR技术原理及应用
LM Su, 2015 Vazyme, China
主要内容
qPCR的原理
化学原理
数学原理
qPCR的实验流程及注意事项
qPCR的应用
--绝密--
qPCR的原理
什么是qPCR?
Real-time PCR ,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过Ct值和标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
qPCR 化学原理
荧光(染料、荧光基团)
SYBR
TaqMan
qPCR 化学原理
SYBR
一种DNA小沟非饱和性结合染料
与DNA结合时发光/不结合(游离)时不发光
每形成一条DNA双链,就会有一定数量的染料结合上去
染料一结合,就会产生荧光信号
信号强度与DNA分子总数目成正比(unless)
变性
退火
延伸
SYBR VS TaqMan Probe
SYBR
TaqMan
优点
价格便宜
特异性高
适用性广
支持多重荧光定量
操作方便
缺点
引物要求高
价格贵
特异性稍差
只适合特定目标
不能进行多重定量
qPCR 化学原理
数学原理: 通过循环数“n”(Ct值)来计算N0
起始DNA量 VS CT
qPCR 数学原理
N = N0 x 2n
qPCR 数学原理
N = N0×(1+e)n
N
产物分子数
N0
起始分子数
e
扩增效率
n
循环数
qPCR 数学原理