文档介绍：实验三
细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰氏染色
目的要求
染色剂和染色的原理
实验材料
实验程序
思考题
学****微生物涂片
掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法
进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术
微生物染色的基本原理,是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素如:细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素如:正负离子之间的相互吸引等
染色剂
染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型:
1. 酸性染料:如酸性复红、刚果红、伊红、藻红等。
2. 碱性染料:一般有碱性复红、番红、结晶紫、美兰、***紫等,细菌易被碱性染料染色。
3. 中性(复合)染料:如Wright染料和Gimsa染料等(常用于细胞核染色)。
实验材料
涂片染色用的细菌培养物
(us aureus ) 24h的斜面培养物
(Escherichia coli) 24h的斜面培养物。 (Bacillus subtilis) 12—16h的斜面培养物。
载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。
显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。
实验程序(细菌染色的方法和步骤)
细菌染色的方法:
:用一种染色液染菌体后,就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况,但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 :用两种或两种以上染色液进行染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称鉴别染色法。常用的有:革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。
染色技术的一般过程涂片干燥固定染色媒染脱色复染
水洗干燥镜检
实验程序(简单染色的方法和步骤)
简单染色法(一般染色法) :
:自然晾干或酒精灯高处微微加热。 4 固定 :在整个涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染色1分钟。 :倾去染液,用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。 7干燥:空气中自然干燥。
8 镜检:在油镜下观察细菌形态并绘图。
实验程序 (革兰氏染色的方法和步骤)
革兰氏(Gram)染色法 1. 涂片 2. 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1分钟,倾去染液,流水冲洗至无紫色。 3. 媒染:先用新配的路哥氏碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1分钟,水洗。 4. 脱色:除去残水后,滴加95%酒精进行脱色约30秒,后立即用流水冲洗。 5. 复染:滴加番红染色液,染1分钟,水洗后晾干或吸水纸吸干。 6. 镜检:观察染色结果并绘图。