文档介绍：《食品微生物学实验》 开放性实验项目报告书
“校园湖水中细菌学检查”
一、实验流程图
参考文献:1. ,GB/2003:1318
2. 论大肠菌群检测方法(华中农业大学学士学位论文)
3. 《水环境中大肠菌群的检测方法的研究》
4. 中国环境检测《水中大肠菌群的快速检测方法》
5. 环境保护与循环经济《水环境中大肠菌群的检测方法的研究》
6. 环境工程微生物学第二版,周群英、高延耀篇著高等教育出版社出版
, 王国惠主编化学工业出版社出版
,马放、任南琪、杨基先主编哈尔滨工业大学出版社出版
,乐毅全、王士男化学工业出版社
二、实验目的
1. 学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法;
2. 掌握水样中大肠菌群测定的原理、意义和检测方法。
三、实验原理
:水中的细菌总数越多,说明水中有机物的含量就越高,水体被污染的程度越重。水中细菌的种属繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌,可在牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。
:大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
MPN法是一种将样品多次管稀释至无菌的计数方法,将三个稀释梯度的待检验样品稀释液接种于九只或15只试管培养基中,每个稀释梯度样液接种3或5支,经过培养后查阅MPN检测表,就可以得到原来样品液中微生物的估计数量。
:按中华人民共和国国家标准GB17324—≤20cfu/1ml。大肠菌群≤3mpn/100ml。致病菌不得检出。。其中一项不合格者为不合格产品。
四、实验步骤
(一)材料的采集:校园湖水——星月湖
取距湖水面10-15cm深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱4°C中保存,但不能超过24h。
(1)成份:,,,琼脂5g, 蒸馏水250ml., 2%伊红5ml,。
(2)制备:先将琼脂加至200ml蒸馏水,加热溶解,后加入磷酸氢二钾及蛋白胨乳糖使之溶解,再调pH=-,再加入伊红,美蓝水溶液, 置于高压灭菌锅内以(115℃)灭菌20min,储存于冷暗处备用。
(1) ,,Nacl ,琼脂3g, 蒸馏水250ml.
(2)pH=
(3)制备:将上述成份依次倒入装有250ml蒸馏水的烧杯中溶解,待全部溶解后,加水补足因加热蒸发的水量,用10%。塞上棉塞,包扎好待灭菌。
(单料)
(1)成分
蛋白胨 20g 、猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 、乳糖 10g 、%溴甲酚紫水溶液 25mL、
蒸馏水 1 000mL、pH
(2)制法
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。
注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
6、乳糖胆盐发酵管(单料,双料一起配制,按样品份数成比例配制,双料:单料=1:2)
蛋白胨 40g 、猪胆盐(或牛、羊胆盐) 10g 、乳糖 20g 、%溴甲酚紫水溶液 12mL (酌情增减)、蒸馏水 1 000mL 、 pH
(3)按样品份数*45=所需配制量,按上述比例换算配料称取量。
(4)将试管排好,放入小倒管(管口朝下),1份样品需9支试管,其中3支配双料,6支配单料。
(5)锅中放入比所需配制量略多的蒸馏水(考虑加温煮沸时蒸发)按1换算值称取配料、乳糖,放入锅中,静置10-15分钟,小火煮沸5-10分钟,同时不断搅拌。
(6)用40g/,加入溴甲酚紫水溶液,