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血红蛋白的分离和提取.ppt

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血红蛋白的分离和提取.ppt

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课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的
提取和分离,理解色谱法、电泳法
课题重点:凝胶色谱法的原理和方法
课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理
和色谱柱的装填
思考:
“课题1--DNA的粗提取与鉴定” 实验理想的材料是什么? “课题3--血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么?原因是?
答:鸡的红细胞具有细胞核,含有DNA,便于进行DNA的提取,哺乳类动物成熟的红细胞无细胞核,结构简单,血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。
基础知识:
蛋白质分离原理
蛋白质分离的方法
凝胶色谱法:又称分配色谱法
电泳法
缓冲液的作用
二、实验操作--实验步骤
血液组成成分
(1)洗 涤 红 细 胞
(2)释放血红蛋白
(3)分离血红蛋白
(4)透析血红蛋白
1、样品
处理
3、纯化
4、纯度鉴定
2、粗分离
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度
凝胶色谱法进行纯化
注意事项
01
蛋白质提取与分离的依据--
蛋白质的物理化学性质差异:
03
电荷性质和多少
单击此处添加正文。
05
吸附性质
单击此处添加正文。
02
分子的形状、大小
单击此处添加正文。
04
溶解度
单击此处添加正文。
06
对其他分子亲和力
单击此处添加正文。

凝胶
概念:
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法
一些微小多孔的球体
(内含许多贯穿的通道,具多孔的凝胶就叫分子筛)
3、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,( )的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程( ),移动速度( ),而( )的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在( )移动,路程( ),移动速度( ),相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
相对分子质量较小
较长
较慢
相对分子质量较大
凝胶外部
较短
较快
总结:大分子经过路程短,流动快;
小分子经过路程长,流动慢。
洗脱:
从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。
混合物
上 柱


大分子流动快
小分子流动慢
收 集
大分子
收 集
小分子
4、具体过程
2.凝胶电泳法:
影响蛋白质分子运动速度的因素
1)原理:
不同蛋白质的带电性质(正电荷或负电荷)、电量、分子形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
电泳:带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
常用电泳方法
#2022