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课题的目标：通过尝试对血液中血红蛋白的
提取和分离，理解色谱法、电泳法
课题重点：凝胶色谱法的原理和方法
课题难点：样品的预处理、色谱柱填料的处理
和色谱柱的装填
思考：
“课题1--DNA的粗提取与鉴定” 实验理想的材料是什么？ “课题3--血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么？原因是？
答：鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，哺乳类动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。
基础知识：
蛋白质分离原理
蛋白质分离的方法
凝胶色谱法：又称分配色谱法
电泳法
缓冲液的作用
二、实验操作－－实验步骤
血液组成成分
（1）洗 涤 红 细 胞
（2）释放血红蛋白
（3）分离血红蛋白
（4）透析血红蛋白
1、样品
处理
3、纯化
4、纯度鉴定
2、粗分离
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度
凝胶色谱法进行纯化
注意事项
01
蛋白质提取与分离的依据－－
蛋白质的物理化学性质差异：
03
电荷性质和多少
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05
吸附性质
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02
分子的形状、大小
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04
溶解度
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06
对其他分子亲和力
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凝胶
概念：
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法
一些微小多孔的球体
（内含许多贯穿的通道，具多孔的凝胶就叫分子筛）
3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
相对分子质量较小
较长
较慢
相对分子质量较大
凝胶外部
较短
较快
总结：大分子经过路程短，流动快；
小分子经过路程长，流动慢。
洗脱：
从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
混合物
上 柱
洗
脱
大分子流动快
小分子流动慢
收 集
大分子
收 集
小分子
4、具体过程
2．凝胶电泳法：
影响蛋白质分子运动速度的因素
1）原理：
不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、分子形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
常用电泳方法
#2022