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Chemistry
Chemistry
3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范试验围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可测定生成化合物的吸光度，由原则曲线反推出还原糖的浓度。操作简便，迅速，杂质干扰较少，适于生物制氢中还原糖含量的测定。
试验原理
Chemistry
显色条件包括:
波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度，显色温度，有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等。本次试验选择波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度进行试验。
一．试剂的配置
DNS试剂：， 加热， 3，5-二硝基水杨酸（DNS），另配制2mol/lNaOH溶液，，，蒸馏水定容至100ml，该试剂避光保留7～10天。
葡萄糖原则溶液（*10-2mol/l）：，待溶解后定容至100ml容量瓶中。
葡萄糖原则溶液（*10-3mol/l）：取10ml上述10-2mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
葡萄糖原则溶液（*10-4mol/l）：取10ml上述10-3mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
试管号
0
1
2
3
4
DNS/ml
0
2
2
2
1
水/ml
3
1
糖/ml
0
0
1
（10 -3mol/l）
1
（10-4mol/l）
2
（10-2mol/l)
1. 波长选择 取5支试管按下表加对应溶液，沸水浴15min, 均加入7ml水定容为10ml，流水冷却，在不一样波长处分别进行扫描。
图1为不一样条件下溶液的波长——吸光度图（水调零）。 由图1可以看出白色与绿色曲线几乎重叠，，用比色法很难辨别，。
由DNS＋H2O曲线可以看出当波长不小于530nm时，DNS的吸光度已经很小，这时DNS对反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽视。
4号试管稀释10倍后波长扫描
吸光度A
λ/nm
图2为4号试管稀释10倍后波长扫描图
4号试管用高浓度的葡萄糖溶液和少许的DNS试剂反应，使生成大量的氨基化合物，但其吸光度太大，仪器无法测定，故将其稀释10倍。以水调零未出现最高峰，以DNS调零时（图2）在540nm处有最高峰，这阐明在该浓度下，DNS也许会对氨基化合物吸光度的测量有较大影响，故测量时以DNS调零较精确。选择540nm作为最佳吸取波长。
取试管按下表加对应溶液，沸水浴30min, 加入适量水使定容为10ml，流水冷却，以1号试管中DNS溶液为参比，在540nm处测吸光度。
试管号
0
1
2
3
4
5
6
7
DNS/ml
0
2
1
2
3
水/ml
3
1
11*
10-4mol/l葡萄糖
0
0
1
1
1
1
1
1
由图3可以看出溶液的吸光度伴随DNS用量的增大而增大，，吸光度反而下降，这阐明DNS的用量不是越多越好，只要在与糖的反应中DNS有剩余即可。假如DNS用量过多，会使测量时DNS溶液浓度过大，导致测量不准。综合考虑，本次试验选定的DNS用量为2ml。
(水浴时间) 取试管按下表加对应溶液，沸水浴对应时间后,加入7ml水定容为10ml，流水冷却，以6号试管中的DNS试剂调零，在540nm处测吸光度。
试管号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
DNS/ml
0
2
2
2
2
2
2
2
2
2
水/ml
3
1
11*10-4mol/l糖/ml
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
煮沸时间/min
15
5
10
15
20
25
15
30
40
50