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一、目的规定
二、基本原因:
此法是运用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观测在一定的容积中的微生物的个体数目,然后推算出含菌数,包括死活细胞均被计算在内,尚有微小杂物也被计算在内。
这样得出成果往往偏高。这种措施常用于形态个体较大的菌体或孢子。
计数板是一块特制的厚玻璃片,玻片上有四个槽构成三个平台,中央平台又由一短槽隔成两半,其上各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数室。
计数室刻度有2种:一种是25中格X16小格,而另一种为16中格X25小格,它们都是由400个小格构成。每个大方格边长为1mm,则每个大方格面积为1X1=1mm2。盖上盖玻片后,, X 1 X 1=,每个大格有400个小格,=1/4000mm3=1/4000,000ml。
血球计数板的分区与分格
例一 例二
1大格=16中格 1大格=25中格
=16 X 25小格 =25 X 16小格
=400小格 =400小格
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三、材料与仪器:
1、待测样品:酵母菌悬液
2、显微镜,血球计数板,接种环,盖玻片等。
四、措施与环节:
1、取洁净的血球计数板,在计数室上面盖上盖玻片。
2、取稀释到一定程度(5~10个酵母/小格)酵母液,从盖片边缘滴一小滴,使菌液自行渗透,计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后,再转换高倍镜观测并计数。3、如用16 X 25计数板,只计四个角上中方格的菌数。若是25 X 16的计数板,除计数四个角上的中格菌数外,还要计算中央中格的菌数。每个样品反复计数2~3次。计数时应不时调整焦距,才能观测到不一样深度的菌体。
4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。
5、计数措施:
样品中菌数/ml=每小格平均菌数 x 4000 ,000x 稀释倍数,本试验采用25 x 16规格,规定数这些方格中的所有小格即80个小格。
设:每个中方格的菌数为A,则
每小格平均菌数=(A1+A2+A3+A4+A5)/80
A1+A2+A3+A4+A5
样品中的菌数/ml= X 4000,000 X 稀释倍数
80
成果记录:
微生物名称 总菌数 个/ml
第一个
中格
第二个
中格
第三个
中格
第四个
中格
第五个
中格
第一次
测定
第二次
测定
平均
四、测定注意事项:
1、测定期,酵母菌液要摇匀,防止酵母凝聚沉淀。
2、活酵母有芽殖现象,若芽体达到母细胞大小的二分之一时,即可作为两个菌体计数,若芽体不不小于母细胞二分之一时为1个酵母细胞。
3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。
五、思考题:
1、用血球计数板计数时,哪些环节易导致误差?
2、血球计数板测定原理是什么?它有哪些长处?