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生物素亲和素标记技术公开课一等奖课件赛课获奖课件.ppt

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生物素亲和素标记技术公开课一等奖课件赛课获奖课件.ppt

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广州医学院第一附属医院检查科
廖伟娇
一、生物素及其理化性质
1 概念
2 分子式
构造特点
溶解特性
等电点
其他特性
1 概念:
生物素(biotin)是动、植物体内广泛分布的一种小分子生长因子,又名辅酶R或维生素H。
分子式:
C10H16O3N2S 分子量:
构造特点:
咪唑酮环/四氢噻吩环
结合亲和素 侧链末端羧基结合蛋白质
溶解特性:
难溶于水,易溶于二甲基甲酰胺(DMF)
等电点:
PH=
其他特性:
羧基需经活化修饰才能结合蛋白质
(羧基活化的生物素,称为活化生物素,也叫生物素衍生物)
生物素衍生物的种类及特性:
1 生物素羟丁酰亚胺酯(BNHS):
DMF
制备:生物素 + N-羟基琥珀酰亚胺
二环已基碳二亚胺
标识特点:
BNHS中的羧基与蛋白质中的赖氨酸氨基
结合达到标识的目的
合用于:标识Ab、酶、中性或偏碱性Ag、DNA
长臂活化生物素(BCNHS):
DMF + 6-氨基已酸
制备:生物素 + N-羟基琥珀酰亚胺
二环已基碳二亚胺
(在BNHS的B与羧基之间插入2分子的6-氨基已酸 )
标识特点: (同BNHS)
BCNHS中的羧基与蛋白质中的赖氨酸氨基结合达到标识的目的
合用:(同BNHS) 标识Ab、酶、中性或偏碱
性的Ag、DNA
3 生物素酰肼(BHZ):
制备:生物素 +水合肼
标识特点:
BHZ与蛋白质中的醛基结合而标识
合用:标识偏酸性的蛋白质、酶、DNA
三、亲和素及其理化性质
1 概念
2 分子式
构造特点
溶解特性
等电点
其他特性
1 概念:
亲和素(avidin):是动物微生物中提取的一种含10%碳水化合物的碱性糖蛋白。
链霉亲和素:是从链球菌属的菌培养液中提取的一种蛋白质
分子量:
A:
SA: 6~