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植物生物学试验(二)
植物生理学基础与综合试验
南京师范大学生命科学学院
一、试验目的
理解根系活力的生理意义;
掌握a-萘胺氧化法, 测定根系活力的原理与措施。
掌握分光光度计的使用过程和注意事项
二、试验原理
(一)植物根系的生理功能:
吸取:水分、无机盐、CO2。
输导
固着
合成
贮藏
根系吸取无机盐的过程:
部位:根尖,根毛区最活跃。
环节
;
;
+与HCO3 -吸附在根表面。
-、 H+互换。
,进入根内部。
。
根系活力即根的生长状况和代謝水平。它直接影响植物地上部的生长和营养状况以及产量。
植物根系中的过氧化物酶能氧化α-萘胺,生成红色的α-羟基-1-萘胺,并沉淀于根表面,将根系染成红色。
一般来说根呼吸强度越大,即该酶的活力越强,对α-萘胺的氧化力也越强,染色也越深。
可以根据根系表面着色深浅,定性观测并判断根系活力大小,也可通过测定溶液中未被氧化的α-萘胺的量,以定量测定根系活力。
(二)根系活力的意义与测定措施
定性观测
根系表面红色越深,阐明根系活力越强。
定量测定
剩余的α-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯磺酸(sulfanil-amide)和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮染料。
定量测定
对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺
生成的红色偶氮化合物在pH nm处有最大吸取峰,可用分光光度法测定光吸取值,从而运用此反应来间接测定溶液中α-萘胺的量。
注意:
OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱
反应液的酸度大则增长重氮化作用的速度,但减少偶联作用的速度,颜色比较稳定。增长温度可以增长反应速度,但减少重氮盐的稳定度,因此反应需要在相似条件下进行。
三、试验材料与仪器设备
(一)试验材料
水稻(Oryza sativa L.)等水生植物的须根系。
(二)仪器与用品
分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒。
(三)试剂
α-萘胺溶液:先用少许的95%酒精溶解,然后加水定容。分别配制50 μg/mL、25 μg/mL溶液。
mol/L磷酸缓冲液,pH 。
1%对氨基苯磺酸溶液:溶解于30%的醋酸溶液中。
%亚硝酸钠溶液。