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SMARTer® RACE 5’/3’ Kit
From TaKaRa
Code:624858
RACE试剂盒原理和注意事项专家讲座
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原理
SMARTScribe Reverse Transcriptase
SMARTer II A Oligonucleotide
（-70℃）
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5’RACE First-Strand cDNA Synthesis 试剂清单
10 μl SMARTer II A Oligonucleotide (24 μM)(-70℃)
10 μl 5' RACE CDS Primer A (12 μM)
40 μl 5X First-Strand Buffer (RNAse-Free)
5 μl Dithiothreitol (DTT) (100 mM)
1 ml Deionized H2O
10 μl RNase Inhibitor (40 U/μl)
20 μl SMARTScribe Reverse Transcriptase (100 U/μl)
10 μl dNTP mix (20 mM)
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5’RACE PCR 试剂清单
400 μl 10X Universal Primer A Mix (UPM)（混合引物）
50 μl Universal Primer Short (10 μM)(已合成)
ml Seq Amp PCR Buffer (2X)（混合试剂）
50 μl SeqAmp DNA Polymerase(已用完)
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GSP引物设计
23-28bp, 50%-70%GC
Tm ≥65°C, best results Tm >70°C
Product range: 1-3kb
Add GATTACGCCAAGCTT to 5’ ends（linearized pRACE vector）
Nested primer
Long primer =
5’CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAG
AGT–3'
Short primer = 5’–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3’
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RACE-Ready cDNA取得
在全部过程中都使用Tricine-EDTA Buffer稀释cDNA样本
Protocol有改变
20ul
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5’Rapid Amplification of cDNA Ends (5’RACE)
Protocol改动
含dNTP
已用完
混合引物
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5’Rapid Amplification of cDNA Ends (5’RACE)
Program改变
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详细参考试剂盒配套说明书
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试验室惯用DNA polymerase
Easy Taq AP111
TaKaRa Taq R001B
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