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菌落总数
总大肠菌群
耐热大肠菌群
水质检测微生物指标专家讲座
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一、菌落总数
——平皿计数法
:
菌落总数（standard plate-count bacteria）水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含细菌总数。
厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求以及非嗜中温细菌，因为现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。所以菌落总数并不表示实际中全部细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
：营养琼脂
：培养箱36 ℃+1 ℃等
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生活饮用水
1mL水样+15mL45℃左右琼脂 摇匀，做平行样和空白对照。冷却后，翻转平板，36 ℃+1 ℃培养48h后计数。
水源水
先制成1：10，1：100等稀释液，再按生活饮用水检验步骤进行检验。
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注意事项
（1）操作要快而准，包含材料、加样、倒培养基。
（2）吸液体时液体不能进入吸头。
（3）样品稀释时一定要混匀。
（4）倒培养基前，瓶口要过火焰。
（5）一定要有空白对照。
（6）培养基温度控制，培养基薄厚。
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作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检验，以防遗漏。在记下各平皿菌落数后，应求出同稀释度平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采取，而应以无片状菌落生长平皿作为该稀释度平均菌落数。若片状菌落不到平皿二分之一，而其余二分之一中菌落数分布又很均匀，则可将此平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度平均菌落数。
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①首选30～300之间进行计算，若只有一个稀释度平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例1）。
②若有两个稀释度，其生长菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应汇报二者平均数（见表1实例2），若大于或等于2则汇报其中稀释度较小菌落数（见表1实例3、4）。
③若全部稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例5）。
④若全部稀释度平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例6）。
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⑤若全部稀释度平均菌落数均不在30～300之间，则应以最靠近30或300平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例7）。
⑥若所以稀释度平板上均无菌落生长，则以未检出汇报之。
⑦假如所以平板上都菌落密布，不要用“多不可计”汇报，而应在稀释度最大平板上，任意数其中2个平板1cm2中菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，，再乘其稀释倍数作汇报。
⑧菌落计数汇报：菌落数在100以内时按实有数汇报，大于100时，采取两位有效数字，在两位有效数字后面数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面零数也可用10指数来表示。
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表1 稀释度选择及菌落总数汇报方式
实例
不一样稀释度平均菌落数
两个稀释度菌落数之比
菌落总数/（CFU/mL）
汇报方式
/(CFU/mL)
10-1
10-2
10-3
1
1365
164
20
——
16400
×104
2
2760
295
46
37750
×104
3
2890
271
60
27100
×104
4
150
30
8
2
1500
×103
5
多不可计
1650
513
——
513000
×105
6
27
11
5
——
270
×102
7
多不可计
305
12
——
30500
×104
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二、总大肠菌群
——多管发酵法（另有滤膜法和酶底物法）
总大肠菌群（total coliforms）指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
：乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基和革兰氏染液。
：培养箱、平皿和试管等。
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①乳糖发酵试验
取1mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注入9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸收1mL（）注入到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。
对已处理过出厂自来水，需经常检验或天天检验一次，可直接接种5份10mL水样双料培养基，每份接种10mL水样。
检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，，， ，，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取1mL接种，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌刻度吸管。
接种管置36 ℃+1 ℃培养箱内，培养24h+2h后,如全部乳糖蛋白胨培养管都不产酸产气，则可汇报为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按以下步骤进行。
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