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了解细胞培养常规知识和无菌操作基本标准
掌握贴壁细胞复苏方法；
掌握镜下观察贴壁细胞生长状态方法
了解细胞培养基础知识
细胞培养实验
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二、试验内容
细胞复苏
细胞观察
细胞培养实验
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三、试验材料及仪器
1、材料：
人肺癌细胞
细胞培养基（RPMI1640液体培养基,10％胎牛血清,双抗100单位/ml）
PBS
细胞培养耗材
2、仪器：
二氧化碳培养箱
倒置显微镜
生物安全柜
液氮罐
离心机
细胞培养实验
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四、细胞复苏方法
（1）从液氮中取出冷冻管，快速投入37～ 38℃水浴中，使其融化（1分钟左右）；
（2）5分钟内用培养基稀释至原体积10倍以上；
（3）低速离心10分钟；
（4）去上清，加新鲜培养基培养刚复苏细胞。
细胞培养实验
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基本概念
细胞系（Cell line）：原代培养物经首次传代成功后即为细胞系。
细胞株（Cell strain）：经过选择法或克隆法从原代培养物或细胞系中取得含有特殊性质或标志培养物称细胞株。
细胞培养实验
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有限细胞系（finite cell line）：细胞系形成后仅能维持有限传代次数，最终死亡。
连续或无限细胞系（ continuous cell line or infinite cell line）：含有没有限繁殖能力（取得不死性）和能重复进行传代细胞系。
细胞培养实验
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细胞培养优点
可长时间监控、检测，定量评定一部分活细胞情况。
研究条件可人为控制。
研究样本能够到达比较均一性。
研究内容便于观察、检测和统计。
研究范围比较广泛。
研究费用相对较经济。
细胞培养实验
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细胞培养缺点
生存在人工培养环境中，即使模拟体内环境，但仍有很大差异。
细胞培养实验
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培养细胞形态学方面检测
肉眼观察培养基颜色改变
桃红色：正常情况
橙黄色: 细胞生长状态良好
淡黄色: 培养时间过长,营养不足,死亡细胞过多
紫红色: 细胞没有生长、生长状态不好、或已死亡
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相差显微镜观察活细胞
细胞生长状态良好：透明度大，细胞内颗粒少，没有空泡，胞膜清楚。培养上清清澈透明，看不到悬浮细胞或碎片。
细胞生长状态不良：胞质中常出现空泡、脂滴和颗粒物质，细胞形态可变得不规则，甚至失去原来特点。
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