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试验目的
掌握浓盐法提纯RNA的基本原理和措施
理解RNA成分鉴定的原理及其措施
试验原理
核酸的分类与分布
DNA:重要存在于细胞核的染色体中,
线粒体、叶绿体、质粒有少许
RNA:存在于细胞质中
样本的选择:
酵母RNA(RNA占干重的3%-10%)
制备措施:
稀碱法、浓盐法
破碎细胞
提取
纯化
-内容物释放
、纯化
,并去除杂质
 
制备过程:
RNA以可溶性钠盐的形式游离析出
离心去除菌体,搜集上清液,调至RNA的等电点(pH2~)
使RNA沉淀析出,离心搜集沉淀
乙醚洗涤沉淀、去除杂质、提纯RNA
浓盐加热使酵母细胞壁破裂,蛋白质变性沉淀
RNA提取措施(浓盐法)
RNA成分鉴定
RNA在强酸性条件下沸水浴加热可以水解:
1. 磷酸鉴定
通过鉴定RNA的三种水解产物来鉴定RNA:
钼酸铵
磷钼酸+FeSO4
钼蓝
(蓝色)
2. 碱基(嘌呤)鉴定
3. 核糖鉴定
5-甲基间苯二酚
(蓝绿色)
糠醛