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一、亲和层析
二、金属离子亲和层析
三、金属离子亲和层析应用
四、金属离子亲和层析局限
金属离子螯合层析专家讲座
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一、亲和层析
亲和层析是利用配基、配体之间专一可逆结合性质进行物质分离方法,所以其专一性、选择性是极高。
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亲和层析过程
1、寻找可与底物专一可逆结合配基
2、将配基经过共价键偶联到基质，并要求偶联后配基与配体亲和力不变
3、配基与配体吸附并与杂质分离，将杂质洗出
4、洗脱目标物
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亲和层析分类
1、生物亲和层析
2、免疫亲和层析
3、金属离子亲和层析
4、有机染料亲和层析
5、拟生物亲和层析
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二、金属离子亲和层析（IMAC）
金属离子亲和层析是建立在蛋白质表面暴露一些氨基酸残基与固定化金属离子亲和力不一样来进行蛋白质分离纯化一项技术
金属离子：锌、铜、铁等
氨基酸残基：组氨酸咪唑基、半胱氨酸巯基、色氨酸吲哚基
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金属离子亲和层析优点
1、配基简单，吸附容量大
2、价格廉价，投资低
3、通用性强
4、分离条件温和
5、金属离子配基含有很好稳定性，且层析柱可长久连续使用，易于再生。
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三、金属离子 亲和层析应用
纯泰 Ni-NTA金属螯合His蛋白纯化介质填料（His镍柱）
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（一）、用于分离纯化变性蛋白
金属离子亲和层析复性中，蛋白质能可逆吸附在固相介质上，可防止伸展多肽分子之间形成聚集体。在高浓度变性剂存在情况下，组氨酸尾依旧含有吸附在金属离子亲和层析介质上能力，所以可在IMAC介质上同时实现复性与纯化。蛋白质吸附在IMAC介质上后，先逐步降低变性剂浓度，使蛋白质折叠，然后提升咪唑浓度把折叠后蛋白质洗脱出来。对于TNF蛋白，使用IMAC可取得90％复性收率。
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