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蛋白质的性质实验
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、定量分析方法及原理
【试验目标】
蛋白质的性质实验
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一、蛋白质呈色反应
蛋白质呈色反应是指蛋白质所含一些氨基酸及其特殊结构，在一定条件下可与一些试剂发生了生成有色物质反应。
不一样蛋白质分子所含氨基酸残基不完全相同，所以所发生成色反应也不完全一样。
呈色反应并不是蛋白质专一反应。所以，不能仅仅依据呈色反应结果为阳性就来判断被测物质一定是蛋白质，最少要用2种以上方法来判别。
蛋白质的性质实验
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（一）双缩脲反应
【试验原理】
当尿素经加热至180℃左右时，两分子尿素脱去一分子氨，进而缩合成一分子双缩脲。其在碱性条件下双缩脲与铜离子结合成红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。其反应过程以下：
蛋白质的性质实验
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多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键，其结构与双缩脲分子中亚酰胺键相同。所以，在碱性条件下与铜离子也能展现出类似于双缩脲呈色反应。其反应过程以下：
蛋白质的性质实验
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【试剂】
蛋白质溶液（鸡蛋清用蒸馏水稀释10倍，
经过2-3层纱布滤去不溶物）
2. %甘氨酸溶液
3. %精氨酸溶液
4. 10%NaOH溶液
5. 1%CuSO4溶液
6. 尿素结晶
蛋白质的性质实验
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【试验流程】
双缩脲制备
少许尿素结晶于干燥试管中
微火加热
尿素熔解至
硬化
停顿加热
看到有白色气体
冷却
加10%氢氧化钠
溶液约1ml
震荡
加入1%硫酸铜溶液2滴
震荡
观察颜色改变
如图所表示
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注意：
(1)尿素结晶不要取多，约火柴头大小。
(2)在操作过程中试管不能冲向他人以预防烫伤。
(3)控制加热时间既不能过长也不能过短。
(4)加热时火不能太大，预防碳化。
(5)铜离子不能多加，不然与氢氧化钠形成蓝色氢氧化铜，干扰试验结果。
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（二）茚三酮反应
【试验原理】
在弱酸条件下（pH5-7），蛋白质或氨基酸与茚三酮共热，可生成蓝紫色缩合物。此反应为一切蛋白质和α—氨基酸所共有(亚氨基酸如脯氨酸和羟脯氨酸产生黄色化合物)，含有氨基其它化合物亦可发生此反应。
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【试剂】
（与双缩脲反应相同）
2. %甘氨酸溶液
3. %茚三酮溶液
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