文档介绍：1、核酸的增色效应;核酸变性后,增加了A260的光吸收称为增色效应。
变性后DNA溶液的紫外线吸收具有增强的效应,变性DNA的双链解开,碱基中电子的相互作用有利于紫外线吸收,故而产生增色效应。一般以260nm下的紫外线吸收光度作为此效应的指标,DNA变性后260nm处的吸收光度通常有明显增加,但不同来源DNA的变化不一。
核酸的减色效应;双螺旋结构和3’,5’-磷酸二酯键的形成都会减弱碱基对紫外光的吸收,这种效应称减色效应
DNA复性后,其溶液的A260减小,最多可减小至变性前的A260,这现象称减色效应。
核酸的 Tm 值;通常将DNA的变性达到50%时,即增色效应达到一半时的温度称为DNA的解链温度(Tm),Tm也称熔解温度或DNA的熔点。DNA的Tm值一般在70-85℃之间。
加热可以使DNA变性,DNA热变性是在很狭的温度范围内突发的跃变过程,很像结晶达到熔点时的融化现象,故名熔解温度,用Tm表示。Tm定义中包含了使被测DNA50%的双螺旋结构遭到破坏,即增色效应达到一半的温度作为Tm的含义,不同来源的DNATm值一般为70~85℃。
DNA 双螺旋; DNA分子由两条反向平行的多核苷酸链构成双螺旋结构。两条链围绕同一个“中心轴”形成右手螺旋,在螺旋中形成大沟和小沟
两条反向平行的多聚核苷酸链沿一个假设的中心轴右旋相互盘绕而形成,形成一个大沟和小沟,大沟位于相毗邻的双股之间,而小沟位于双螺旋的互补链之间。磷酸和脱氧核糖单位作为不变的骨架组成位于外侧,作为可变成分的碱基位于内侧,链间碱基按A-T,G-C配对,碱基对以氢键维系,配对的碱基处于同一个平面上,与螺旋轴垂直。
核酸分子杂交;把不同的DNA或RNA链放在同一溶液中作变性处理,然后复性,不同来源的DNA或RNA单链之间就按碱基配对原则可能形成局部的双链,这一过程称为分子杂交。
根据变性和复性的原理,将不同来源的DNA变性,若这些异源DNA之间在某些区域有相同的序列,则退火条件下能形成DNA-DNA异源双链,或将变性的单链DNA与RNA经复性处理形成DNA-RNA杂合双链,这种过程称为分子杂交
核小体; 真核生物染色质的基本结构单位,是DNA绕组蛋白核心盘旋所形成的串珠结构
是染色体形成的基本结构单位,是由组蛋白形成的寡聚蛋白体核心和盘绕在其上的DNA组成
退火;热变性DNA在缓慢冷却时,可以复性,这种复性成为退火
核酸变性;核酸双螺旋区的H键断裂,变成单链,没有共价键的断裂。变性的条件:物理的、化学的。如热变性、碱变性等,甲醇、乙醇、尿素、甲醛常用做变性剂。
在一定条件下,DNA双螺旋可以彻底的解链,分离成两条互补的单链,称为DNA的变性。确切的就是维持双螺旋稳定性的氢键和疏水键的断裂,但并不涉及共价键的断裂
核酸复性:指本来是双链而分开的两股单链的重新组合。在一定条件下,变性DNA 单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构,伴有A260减小(减色效应),DNA的功能恢复
变性DNA在适当条件下,两条互补连具有全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转录过程,称为复性
必需氨基酸:人类自身不能合成或不能足量合成,必须依赖食物供给
是指人体需要,但自己不能合成,或者合成量不能满足机体需要的氨基酸,它们必须由食物蛋白供给。
氨基酸的等电点:使氨基酸净电荷为零时溶液的pH值,用 pI 表示。此时,aa 以***离子形式存在,也有少量的数目基本相同的正、负离子存在,还有极少量的中性分子。pI 是氨基酸的特征常数
氨基酸的带电状况与溶液的pH有关,改变pH可以使氨基酸带上正电荷或负电荷,也可以使它处于正负电荷相等,即净电荷为零的兼性离子状态,氨基酸净电荷为零时溶液的pH,称为氨基酸的等电点,用pI表示。
蛋白质的一级结构; 一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序以及二硫键的位置。即多肽链内氨基酸残基从N-末端到C-末端的排列顺序,或称氨基酸序列,是蛋白质最基本的结构。一级结构稳定。
蛋白质共价结构也称蛋白质的一级结构,实质是指多肽链中氨基酸的排列顺序,包括二硫键的位置。这是蛋白质分子结构的基础,包含了决定蛋白质分子所有高级结构层次构象和生物功能的全部信息
蛋白质的二级结构;蛋白质的二级结构是指它的多肽主链折叠的有规则重复的构象,但不涉及侧链上的原子在空间的排列
指多肽主链骨架上所含的羰基和亚氨基,在主链骨架盘绕折叠时可以形成氢键,通过这些氢键的维持固定,多肽链主链骨架上的若干肽段可以形成有规律的空间排布,作为蛋白质高级结构的构象单元。
蛋白质的三级结构; 蛋白质的三级结构是指一条多肽链中所有原子和基团的总的三维结构。在二级结构的基础上进一步盘旋、折叠,从而生成特定的空间结构。包括主链和侧链的所有原子的空间排布。
指