文档介绍：该【基因工程制药版专家讲座 】是由【知识徜徉土豆】上传分享，文档一共【87】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【基因工程制药版专家讲座 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。第三节 基因工程制药生产基本过程
一、工具酶分离纯化
二、载体分离纯化
三、外源DNA和目标基因分离和取得
四、外源DNA与载体DNA切割与连接
五、宿主细胞选择和基因导入操作
六、基因工程菌稳定性及生长代谢特点
七、基因工程菌中试
八、基因工程菌扩增和发酵生产
九、基因工程药品分离和纯化技术
十、变性蛋白复性
十一、基因工程药品质量控制
十二、基因工程药品制造实例
基因工程制药版专家讲座
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血红蛋白基因
血红蛋白基因排列次序
血红蛋白结构
血红蛋白运输氧气功效
血红蛋白基因工程流程
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一、工具酶分离纯化
（一）基因工程制药所用到工具酶
（二）关于限制酶
（三）关于连接酶
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（一）基因工程制药所用到工具酶
限制性内切酶 甲基化酶
Klenow聚合酶 T4-DNA聚合酶
T4-多核苷酸激酶 碱性磷酸酶
核酸酶-S1 核酸酶-Bal31
绿豆核酸酶 核糖核酸酶
人外切核酸酶 DNA酶-1
外切RNA酶-III 外切RNA酶-VI
DNA聚合酶1 T4-DNA连接酶
末端脱氧核苷酸转移酶 T4-RNA连接酶
逆转录酶 大肠杆菌-DNA连接酶
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（二）关于限制酶
1、宿主限制现象
2、限制酶定义
3、限制酶特征
4、限制酶作用
5、基因工程所用到限制酶
6、影响限制酶作用原因
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1、宿主限制现象
病毒或噬菌体在宿主A细胞中生长良好,但在宿主B细胞中生长很差,原因是它DNA受到宿主B限制,这种现象是宿主控制性限制 （restriction）与修饰(modification) ,简称（R/M体系）。
细菌R/M体系类似于免疫系统，能区分本身DNA与外来DNA，并能使后者降解掉。
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R/M体系：
是由两种酶活性配合完成：
一个是修饰甲基转移酶
另一个是核酸内切限制酶
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※当λ(k)，因为其DNA中有EcoB核酸酶特异识别碱基序列，被降解掉。，但可在EcoB甲基化酶作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）将甲基转移给限制酶识别序列特定碱基，使之甲基化。
※EcoB(大肠杆菌B株)核酸酶不能识别已甲基化 序列。
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R/M体系作用：
保护本身DNA不受限制；
破坏外源DNA使之快速降解
TGAN8TGCT
ACTN8ACGA
TGAN8TGCT
ACTN8ACGA
ECOB核酸酶
甲基化酶
CH3
CH3
CH3
CH3
噬菌体起源序列
宿主起源序列
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※限制性内切酶本是微生物细胞中用于专门水解外源ＤＮＡ一类酶，其功效是防止外源ＤＮＡ干扰或噬菌体感染，是细胞中一个防御机制。
※因为R/M现象发觉使得核酸内切酶成为基因工程主要工具酶。
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