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－LD50 与LC50 测定
急性毒性实验终结版专家讲座
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急性毒性试验
试验目标及意义：
确定受试物半数致死剂量LD50/LC50、观察受试物所致急性中毒症状及其毒性作用特点，为深入毒性试验提供主要参考依据。
急性毒性试验染毒方式可有各种，包含经口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。
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经口急性毒性试验（LD50）
试验目标
学习急性毒性试验试验设计标准
熟练掌握经口灌胃染毒操作技术
掌握LD50计算方法和急性毒性分级标准
试验内容
动物选择和性别判定
称重、编号和随机分组
小鼠经口灌胃操作技术
毒性症状观察、LD50计算和毒性分级
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操作步骤
动物选择及性别识别
急性毒性试验普通首选哺乳动物，其中又以大小鼠最为惯用。大、小鼠主要依据肛门与生殖器之间距离来区分。远——♂、近——♀。成年鼠：雄性卧位可见睾丸，雌性可见腹部有12个乳头。
动物称重、编号和随机分组
应依据统计学标准进行随机分组。
1 2 3 4 5 6
1
2
.
.
.
组数
只数
体重
1
2
3
4
5
6
7
8
9
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受试物剂量选择
对于一个新化学物质，剂量选择可参考同系物毒性或文件资料加以预计，先用少许动物以组距较大一系列剂量进行预试验，找出粗略致死剂量范围，然后再设计出正式试验剂量组
受试物配制
此次试验所用受试物是80％敌敌畏(DDVP)原液。按照事先设计剂量分别稀释配制为几个不一样浓度受试物溶液，而各个剂量组动物均给予相同单位体重体积受试化学物。
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剂量mg/kg 原液量(g) 原液量(ml) 定容量(ml) 原液量 (ml)
50
50
50
100 50
140 50
196 50
敌敌畏（DDVP）配制：（，）
（4℃）
（25 ℃ ）
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灌胃操作
将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物上消化道固定成一直线
毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察
高剂量组动物死亡常很快发生，染毒后应即刻亲密观 察。观察和统计中毒症状及出现时间，死亡数量和时间及死亡前特征。按照试验结果，填写急性毒性试验统计表。
中毒症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、大剂量侧卧以致死亡。
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改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈<20%，最高剂量组死亡率>80%。
LD50计算（改良寇氏法）
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依据试验动物中毒症状、死亡时间、特征和LD50，按受试物种类，分别参考对应经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物毒性大小及毒性特征。
毒性分级及结果评定
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健康成年小鼠若干只（按每组5~6人，每组10只动物，♂♀各半）、50 ml容量瓶(每组1个)、加样器（200μl、1000μl）、加样枪头、DDVP原液、1 ml玻璃注射器、灌胃针头（每组2套）、棉签、染液、LD50统计纸、小鼠笼（每组2个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、受试物、苦味酸酒精饱和液、%品红溶液或其它染色剂。
试验课所需准备试剂和材料：
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