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第一节抗体的制备和应用
第二节抗原抗体反应的应用
第一节 抗体的制备
抗血清的制备
单克隆抗体的制备
基因工程抗体的制备
抗体的制备
抗体种类：
第一代抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody)
第二代抗体 单克隆抗体（monoclonal antibody)
第三代抗体 基因工程抗体（genetic engineering antibody)
细胞性抗原：
（1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次
可溶性抗原：
首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周100~200微克抗原，融合前3天，加强免疫
（一）免疫小鼠
动 物：
BALB/c小鼠
7～12周龄
20g～25g体重
（二）骨髓瘤细胞筛选标准：
，但不能分泌。
（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷型。
（三）细胞融合
细胞融合剂：
PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合剂
作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合
作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的PEG，其纯度与毒性有所不同
HAT培养基：
H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤
A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成主要途径
T(Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA
骨髓瘤细胞: HGPRT- ，TK-; 死亡
脾细胞: HGPRT+ ，TK+ ;短命(3天)
杂交瘤细胞:HGPRT+ ，TK+; 长命
骨髓瘤细胞、脾细胞与杂交瘤细胞