基因工程-克隆基因的表达.ppt

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5/28/2025
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遗传信息从DNA到蛋白质的传递过程——中心法则（central dogma）。
一、基因表达：
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二、克隆基因的表达：
外源基因在宿主细胞中表达。
外源基因
表达载体
重组载体
导入宿主细胞
在宿主细胞中
表达出蛋白质
提取蛋白
宿主细胞：
原核细胞或真核细胞。
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第一节 外源基因在原核细胞中的表达
一、原核生物基因表达的特点
二、原核生物基因表达的调控
三、外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位
四、几种类型的原核表达载体
五、影响外源基因表达效率的因素
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六、提高表达水平常用的方法
七、细菌表达载体举例
八、外源蛋白质表达后的正确修饰
九、原核细胞表达的缺陷
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用原核生物作宿主。
A dividing E. coli
第一节 外源基因在原核细胞中的表达
原核或噬菌体启动子
MCS
SD序列
终止子
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识别原核细胞的启动子，催化所有的RNA合成。
数个相关的结构基因与其调控区结合形成一个表达的协同单位。
一、原核生物基因表达的特点
2. 以操纵子为单位
1. 只有一种RNA多聚酶
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有意义链
5’
反意义链
3’
转录
mRNA
5’
3’
翻译
蛋白质
N
C
5’
3’
3. 转录和翻译偶联、连续进行。
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4. 不含内含子，缺乏转录后的加工系统。
5. 调控主要在转录水平上。
含有一个启始密码子和一段同核糖体16SRNA3’末端碱基互补的序列，叫Shine-Dalgarno（S-D）序列。
6. mRNA的核糖体结合位点
Shine-Dalgarno（S-D）sequence:
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