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启动子(Promoters)
是位于结构基因5‘端上游的DNA序列,其长度从100 bp到200 bp不等,与转录起始时RNA聚合酶识别、结合和启动转录有关。
启动子控制基因转录的起始时间和表达的程度。
启动子的组成
promoter
普遍转录因子
(一)氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)
可催化乙酰CoA的乙酰基转移到氯霉素3羟基,而使氯霉素解毒。
线性范围较窄,灵敏性较低
(二)β半乳糖苷酶
由大肠杆菌lacZ基因编码,可催化半乳糖苷水解。
(三) 荧光素酶(Luciferase)
是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称。荧光的产生是来自于荧光素(底物)的氧化,哺乳细胞无内源性荧光素酶。
最常用的荧光素酶有细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和Renilla荧光素酶。萤火虫荧光素酶灵敏度高,检测线性范围宽,是最常用于哺乳细胞的报告基因。
(四)荧光蛋白家族:GFP, BFP,RFP
promoter
luc
荧光素酶报告基因检测
缺失(deletion)
突变(mutation)
荧光素酶报告基因检测
Gel Shift Assay
Electrophoretical Mobility Shift Assay
EMSA
Band Shift Assay
1. Introduction
2. Principle
3. Application
4. Materials
5. Procedure
6. Proof of Specificity
Contents
Regulatory Region
Coding Sequence
Gene Regulation by Transcription Factors
Introduction