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双重或多重标记
要 求：
掌握IHC多重标记染色的基本原理
和技术要求
了解常用方法类型及其优缺点
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概 述
应用IHC的方法在同一张组织切片上同时或先后显示两种或两种以上的抗原成分，即谓双重或多重免疫标记。
显示的水平可以是光镜，也可以是电镜
常用方法类型有：
01
按标记物分：免疫荧光双重标记(FITC-TRITC)，免疫酶双重标记(单酶双底物-HRP:DAB与4CN/ H2O2);AP:萘酚AS-MX/坚固红与坚固蓝；双酶双底物(HRP与AP，DAB /H2O2与萘酚AS-MX /坚固红)；免疫胶体金标记(5nm与15nm)。
02
按有否洗脱去除第一重抗原抗体复合物分：洗脱法与非洗脱法。
03
按抗体制备动物来源分：异种动物抗体法与同种动物抗体法。
02
按标记抗体分：直接、间接法、复合物法等
01
一般多采用荧光或酶标间接法，混合试剂，不洗脱，光镜以双荧光或双底物酶标记为多，颜色区别。电镜以胶体金不同直径颗粒(5nm与15nm)标记为多，颗粒大小区别。
基本原理
双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原抗体复合物，
达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分(定性、定位、定量)，分析不同抗原成分相互间的功能关系，操作遵循的原则与要求同单标免疫组化方法。
为了避免前重免疫标记与后重标记的交叉、重叠，其间可采用酸洗破坏(洗脱法)或饱和封闭(非洗脱法)加以克服。