文档介绍：实验三细菌的分离培养及移植
两个概念:
在细菌学检验中,细菌的分离培养是重要的基本技术之一。
分离:从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法;
纯培养:一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。
实验目的:
1 掌握细菌分离培养的基本要领和方法
2 掌握挑菌、纯培养及移植技术
3 了解细菌的菌落形态及其在各种培养基上的培养性状
实验材料:
球
1 菌种:大肠杆菌肉汤、葡萄球菌斜面、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的混合培养肉汤等;
2 培养基:普通肉汤、普通琼脂斜面、普通琼脂平板
3 器械:记号笔、酒精灯、接种环(针)
接种工具
接种针和接种环:由三部分组成,即环(针)、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌,接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。
接种针
接种环
划线培养时注意问题:
左手持皿,用左手拇指、食指及中指将平皿揭开约呈20°的角度(图1);
右手持接种环,灼烧冷却后从混合培养肉汤中取少量涂布于培养基边缘,开始划线(图2);
划线前先将接种环稍稍弯曲,使之易与琼脂面平行,不致划破培养基;
划线中不易过多的重复旧线,以免形成菌苔;
接种完毕,在皿底作好标记(菌名、日期、接种者等),平皿倒扣,置于37℃培养。
图2 连续划线法分区划线法
图1 划线分离示意图
菌落与菌苔
菌落
菌苔
---琼脂斜面分离法
将37℃下培养24h的平板从温箱取出,挑取单个菌落,镜检不含杂菌,即用接种环挑取单个菌落移植于琼脂斜面培养,所得的培养物即为纯培养物。
图3 斜面接种时试管的拿法
左手斜持菌种管和被接种琼脂斜面管,使管口相互并齐,管底部放在拇指和食指之间,松动两管塞子,以便接种时易拔出(图3)。
右手持接种棒,火焰灭菌后,用右手小指和无名指并齐同时拔出两管塞,将管口进行火焰灭菌,使其靠近火焰。
将接种环深入菌种管内,先在无菌生长的琼脂上接触使之冷却,再挑取少许细菌后拉出接种环立即放入另一斜面培养基上,勿碰及斜面和管壁,直达斜面底部。
从斜面底部开始划曲线,向上至斜面顶端为止,管口通过火焰灭菌,塞好棉塞,灭菌接种环,作好标记,置于37℃温箱培养。(图4)
两试管间的斜面移植