文档介绍：生物技术制药复习要点
第二章:基因工程制药
1、基因工程技术:基因工程技术就是将所要重组对象的目的基因插入载体、拼接、转入新的宿主细胞,构建成工程菌(活细胞),实现遗传物质的重新组合,并使目的基因在宿主细胞中进行复制和表达的技术。
2、基因工程制药的主要步骤:目的基因的获得和克隆、构建DNA重组体、构建工程菌、目的基因的表达、外源基因表达产物的分离纯化、产品的检验
3、目的基因的获得方法:(1)反转录法:包括mRNA的纯化、cDNA第一链的合成、cDNA第二链的合成、cDNA的克隆、将重组体导入宿主细胞、目的cDNA克隆的分离和鉴定。
(2)反转录—聚合酶链反应法:PCR扩增法(3)化学合成法:较小分子的蛋白质或多肽。
4、目的cDNA分离的方法:(1)采用核酸探针杂交法(2)采用免疫反应鉴定法。
5、细胞破碎的方法:(1)物理破碎法:高压匀浆法、高速珠磨法、超声破碎法和高压挤压法(2)化学破碎法:渗透冲击法、增溶法和脂溶法(3)生物破碎法:酶溶法。
第三章:动物细胞工程制药
1、动物细胞的形态:贴壁细胞、悬浮细胞和兼性贴壁细胞
2、接触抑制现象:当细胞在基质上分裂增殖,逐渐汇合成片时,即每个细胞与周围的细胞相互接触时,细胞就停止增殖。此时若能保持充足的营养,细胞仍可存活相当一段时间,但细胞密度不再增加,所以该现象称为接触抑制。
3、生产用动物细胞的获得:(1)原代细胞(2)二倍体细胞系(3)转化细胞系(4)融合细胞系:常用的细胞融合方法有:仙台病毒融合法、聚乙二醇融合法和电融合法(5)重组工程细胞系
4、用于生产的工程菌必须建立两个细胞库:原始细胞库和生产用细胞库。
5、动物细胞培养条件:(1)所有的与细胞接触的设备、器材和溶液,都必须保持绝对无菌,避免细胞外微生物的污染(2)必须有足够的营养物质,绝对不可有有害物质,避免即使是极微量的有害离子的掺入(3)保证有适量的氧气供应(4)需要随时清除细胞代谢中产生的有害物质(5)有良好的适于生存的外界环境,包括pH、渗透压和离子浓度(6)及时分种,保持合适的细胞密度。
6、器材的消毒灭菌方法:(1)物理消毒:紫外线、干热、湿热和过滤等(2)化学消毒:使用各种化学消毒剂和抗生素等。
7、动物细胞培养基:天然培养基(血清、羊水等)、合成培养基(包括氨基酸,维生素、糖类、无机盐和血清等)和无血清培养基。
8、转化细胞系:这类细胞是通过某个转化过程形成的,它常常由于染色体的断裂变成了异倍体,从而失去了正常细胞的特点,而获得了无限增殖的能力。
第四章:抗体制药
1、抗体:能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。它是机体免疫系统受抗源物质刺激后,B淋巴细胞被活化、增殖和活化为浆细胞,由浆细胞合成和分泌的球蛋白。
2、单克隆抗体:针对一个抗原决定簇的抗体,又是单一的B淋巴细胞克隆产生的抗体称为单克隆抗体。单克隆抗体具有高度特异性。均一性,有稳定来源可大量生产等特点。主要用于疾病的诊断和治疗。其缺点是(1)单抗是鼠源性抗体,在人体中可产生人抗鼠抗体,加速了排斥反应,在人体内半衰期只有5-6h,难以维持有效药物作用靶组织时间(2)完整的抗体分子,即Ig的相对分子质量过大,难以穿透实体肿瘤组织,达不到有效的治疗浓度。改造方向:(1)降低单克隆抗体的免疫原性(2)降低单克隆抗体的相