文档介绍：蛋白酶结构
蛋白酶的结构和性质
主要来源:酸性蛋白酶主要来源于哺乳动物的消化道,如胃蛋白酶;部分微生物是酸性蛋白酶的主要来源,如:目前的商品酸性蛋白酶制剂主要是有黑曲霉发酵生产的。
一般性质
分子特性:酸性蛋白酶的最适pH在2-5范围,酶蛋白的等电点在pH3-5,分子量MW30000-35000
催化特性:酸性蛋白酶的最适温度因来源不同而有差异,一般霉菌的蛋白酶的最适温度较高,大部分在50-60℃范围,而来源于动物胃黏膜的蛋白酶的最适温度较低,一般在40℃左右。
酸性蛋白酶的热稳定性较差,一般在50℃都很快失活,此外,酶的热稳定行还受到基质的pH的影响;有酸性蛋白酶不耐低温,在低温条件下,很快失活。许都酸性蛋白酶分子中含有5-10%多糖,对酶的稳定有益
碱性蛋白酶是经细菌原生质体诱变方法造育的2709枯草杆微生物通过深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶,属于一种丝氨酸脆外高碱性蛋白酶,它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸,具有较强的分解蛋白质的能力。生产工艺是采用微滤超滤膜分离、喷雾干燥或真空冷冻干燥等先进技术,广泛应用于食品、医疗、酿造、丝绸、制革等行业。碱性蛋白酶是目前市场上流行的洗涤添加剂,能大幅度提高洗涤去污能力,特别对血渍、汗渍、奶渍、油渍等蛋白类污垢,具有独特的洗涤效果。
碱性蛋白酶在技术上采用细菌原生质体诱变处理方法,从国内碱性蛋白菌生产菌2709枯草杆菌中研究选育出若干稳定高性能菌株,在后处理上,采用去渣盐析沉淀法,减少了蛋白酶的杂质含量和产品特有的气味,提高了溶解速度,与洗涤剂有更好的配伍性,延长了保质期。
碱性蛋白酶是由造育的地衣芽孢杆菌发酵而得,主要成分为枯草杆菌蛋白酶,是一种内切酶,催化部位为丝氨酸,分子量约为27300。
分子特性:大部分微生物产生的中性蛋白酶属于金属蛋白酶,一分子酶蛋白含有一个锌原子,酶蛋白的分子量在35000-40000范围,等电点pH8-9,微生物蛋白酶中,中性蛋白酶的稳定性最差,分子之间最容易发生自溶,即使在低温条件下,也会发生明显的自溶,造成分子量明显降低。
蛋白酶的制备 ————胰蛋白酶的制备
(1)猪胰蛋白酶原的提取
(新鲜的或杀后立即冷藏的),除去脂肪和结缔组织后,绞碎。加入2倍体积预冷的乙酸酸化水()于10~15℃搅拌提取24小时,四层纱布过滤得乳白色滤液, ~,放置3~4小时后用折迭滤纸过滤得黄色透明滤液()。
加入固体硫酸铵(予先研细),(每升滤液加492克)放置过
夜后抽滤(挤压干),得猪胰蛋白酶原粗制品。
蛋白酶的制备 ————胰蛋白酶的制备
(2)胰蛋白酶原激活
向胰蛋白酶原粗制品滤饼分次加入10倍体积(按饼重计)冷的蒸馏水,使滤饼溶
解,得胰蛋白酶原溶液。将研细的固体无水***化钙慢慢加入酶原溶液中(滤饼中硫酸铵的含量按饼重的四分之一计),使Ca2+与SO42-结合后,边加边搅拌均匀,边加边搅拌, CaCl2。
用5M ,加入极少量猪胰蛋白酶(约2-5mg)轻轻搅拌,于室温下活化8~10h,(2~3小时取样一次, HCl稀释),测定酶活性增加的情况。
活化完成(比活约3500~4000BAEE单位)后, ~,抽滤除去CaSO4沉淀。
蛋白酶的制备 ————胰蛋白酶的制备
(3)胰蛋白酶的分离
1. 将已激活的胰蛋白酶溶液按242g/L加入细粉状固体硫酸铵,,放置数小时后,抽滤,弃去滤饼。
,,放置数小时,抽滤,弃去滤液。